วัสดุพืชและเชื้อโรค
ดร. แพท บราวน์ แห่งมหาวิทยาลัยอิลลินอยส์ (ปัจจุบันอยู่ที่ UC Davis) จัดทำแผนที่ประชากรที่ทำแผนที่สมาคมข้าวฟ่างที่เรียกว่าประชากรแปลงข้าวฟ่าง (SCP)มีการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ และเป็นชุดของเส้นที่หลากหลายซึ่งแปลงเป็นช่วงแสงที่ไม่ไวต่อช่วงแสงและมีขนาดเล็กลง เพื่ออำนวยความสะดวกในการเจริญเติบโตและการพัฒนาของพืชในสภาพแวดล้อมของสหรัฐอเมริกาในการศึกษานี้มีการใช้สายพันธุ์ 510 เส้นจากประชากรกลุ่มนี้ แม้ว่าเนื่องจากการงอกที่ไม่ดีและปัญหาการควบคุมคุณภาพอื่นๆ จึงไม่ได้ใช้สายพันธุ์ทั้งหมดเพื่อวิเคราะห์ทั้งสามลักษณะในท้ายที่สุด ข้อมูลจาก 345 บรรทัดถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์การตอบสนองของไคติน, 472 บรรทัดสำหรับการตอบสนอง flg22 และ 456 สำหรับการต้านทาน TLSบี. คุกเคได้รับสายพันธุ์ LSLP18 จาก Dr. Burt Bluhm จากมหาวิทยาลัยอาร์คันซอ
การวัดการตอบสนอง MAMP
มีการใช้ MAMP ที่แตกต่างกันสองรายการในการศึกษานี้ flg22 (แคตตาล็อก Genscript# RP19986) และไคตินต้นข้าวฟ่างปลูกในแผ่นแทรกที่วางบนแฟลตที่เต็มไปด้วยดิน (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) ในเรือนกระจกรดน้ำต้นไม้หนึ่งวันก่อนเก็บตัวอย่างเพื่อหลีกเลี่ยงความชื้นส่วนเกินของใบในวันที่เก็บตัวอย่าง
เส้นต่างๆ ได้รับการสุ่ม และด้วยเหตุผลด้านลอจิสติกส์ จึงถูกปลูกเป็นชุดๆ ละ 60 เส้นสำหรับแต่ละบรรทัด จะมีการปลูก 'กระถาง' สามกระถาง โดยมีเมล็ดสองเมล็ดต่อบรรทัดชุดต่อมาจะถูกปลูกทันทีที่มีการประมวลผลชุดก่อนหน้าจนกระทั่งมีการประเมินประชากรทั้งหมดมีการดำเนินการทดลองสองครั้งสำหรับ MAMP ทั้งสองรายการที่มีการสุ่มจีโนไทป์ใหม่ในแต่ละการทดสอบทั้งสองครั้ง
การตรวจ ROS ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้ากล่าวโดยย่อ ในแต่ละบรรทัด เมล็ดหกเมล็ดถูกปลูกในกระถางที่แตกต่างกัน 3 ใบจากผลต้นกล้าที่ได้ มีการคัดเลือก 3 ต้นโดยพิจารณาจากความสม่ำเสมอไม่ได้ใช้ต้นกล้าที่ดูผิดปกติหรือสูงกว่าหรือสั้นกว่าส่วนใหญ่มากแผ่นใบสี่ใบที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 3 มม. ถูกตัดออกจากส่วนที่กว้างที่สุดของใบที่ 4 ของต้นข้าวฟ่างอายุ 15 วันที่แตกต่างกันสามต้นใบหนึ่งใบต่อใบจากสองต้นและสองใบจากต้นเดียว โดยใบที่สองกลายเป็นตัวควบคุมน้ำ (ดูด้านล่าง)จานถูกลอยแยกกันบน 50 µl H20 ในจานสีดำ 96 หลุม, ปิดผนึกด้วยซีลอะลูมิเนียมเพื่อหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสงและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องข้ามคืนเช้าวันรุ่งขึ้น สารละลายปฏิกิริยาถูกสร้างขึ้นโดยใช้โพรบเคมีเรืองแสง L-012 2 มก./มล. (Wako แค็ตตาล็อก # 120-04891) เปอร์ออกซิเดสมะรุม 2 มก./มล. (ประเภท VI-A, Sigma-Aldrich แค็ตตาล็อก # P6782) และ ไคติน 100 มก./มล. หรือ 2 ไมโครโมลาร์ของ Flg2250 ไมโครลิตรของสารละลายของปฏิกิริยานี้ถูกเติมไปยังสามในสี่หลุมหลุมที่สี่เป็นตัวควบคุมจำลอง ซึ่งมีการเติมสารละลายปฏิกิริยาซึ่งไม่รวม MAMP เข้าไปถึงนั้นแต่ละหลุมมีบ่อน้ำเปล่าสี่บ่อที่มีแต่น้ำเท่านั้น
หลังจากเติมสารละลายปฏิกิริยาแล้ว การเรืองแสงจะถูกวัดโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทแบบตรวจจับหลายจุด SynergyTM 2 (BioTek) ทุกๆ 2 นาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมงเครื่องอ่านเพลทจะทำการตรวจวัดการเรืองแสงทุกๆ 2 นาทีในช่วง 1 ชั่วโมงนี้ผลรวมของการอ่านทั้งหมด 31 ครั้งถูกคำนวณเพื่อให้ได้ค่าสำหรับแต่ละหลุมค่าประมาณสำหรับการตอบสนอง MAMP สำหรับแต่ละจีโนไทป์ได้รับการคำนวณเป็น (ค่าการเรืองแสงเฉลี่ยของหลุมทดลองสามหลุม—ค่าหลุมจำลอง) -ลบด้วยค่าหลุมว่างเฉลี่ยค่าหลุมว่างมีค่าใกล้เคียงกับศูนย์อย่างสม่ำเสมอ
แผ่นใบของนิโคเทียน่า เบนธาเมียนาข้าวฟ่างสายพันธุ์ที่ตอบสนองสูงหนึ่งสาย (SC0003) และสายพันธุ์ข้าวฟ่างที่ตอบสนองต่ำหนึ่งสาย (PI 6069) ยังถูกรวมไว้เป็นตัวควบคุมในเพลต 96 หลุมแต่ละจานเพื่อวัตถุประสงค์ในการควบคุมคุณภาพ
บี. คุกเคการเตรียมหัวเชื้อและการเพาะเชื้อ
บี. คุกเคเตรียมหัวเชื้อตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยสรุป เมล็ดข้าวฟ่างแช่ในน้ำเป็นเวลาสามวัน ล้าง ตักใส่ขวดทรงกรวยขนาด 1 ลิตร และนึ่งที่อุณหภูมิ 15psi และ 121 °C เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงจากนั้น เมล็ดพืชถูกเพาะเชื้อด้วยไมซีเลียที่หมักไว้ประมาณ 5 มิลลิลิตรจากการเพาะเลี้ยงสดของบี. คุกเคLSLP18 แยกและทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 สัปดาห์ โดยเขย่าขวดทุกๆ 3 วันหลังจากผ่านไป 2 สัปดาห์ เชื้อราที่รบกวนเมล็ดข้าวฟ่างจะถูกทำให้แห้งด้วยอากาศ จากนั้นจึงเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 °C จนกระทั่งนำไปปลูกในสนามตลอดการทดลองใช้หัวเชื้อชนิดเดียวกันและทำสดใหม่ทุกปีสำหรับการปลูกเชื้อ เมล็ดข้าวที่มีการรบกวน 6-10 เมล็ดจะถูกใส่ลงในวงของต้นข้าวฟ่างอายุ 4-5 สัปดาห์สปอร์ที่เกิดจากเชื้อราเหล่านี้ทำให้เกิดการติดเชื้อในต้นข้าวฟ่างอ่อนภายในหนึ่งสัปดาห์
การเตรียมเมล็ดพันธุ์
ก่อนปลูกในไร่ เมล็ดข้าวฟ่างจะได้รับการบำบัดด้วยส่วนผสมของยาฆ่าเชื้อรา ยาฆ่าแมลง และสารปลอดภัยที่ประกอบด้วย ~ 1% ยาฆ่าเชื้อรา Spirato 480 FS, ยาฆ่าเชื้อรา Sebring 480 FS 4%, สารปลอดภัยสำหรับเมล็ด Sorpro 940 ES 3%จากนั้นนำเมล็ดไปตากให้แห้งเป็นเวลา 3 วัน ซึ่งจะทำให้ส่วนผสมนี้เคลือบบางๆ รอบเมล็ดสารปลอดภัยอนุญาตให้ใช้สารกำจัดวัชพืช Dual Magnum เป็นวิธีการรักษาก่อนเกิด
การประเมินความต้านทานโรคใบจุดเป้าหมาย
SCP ถูกปลูกที่สถานีวิจัยพืชผลกลางในเคลย์ตัน รัฐนอร์ทแคโรไลนา เมื่อวันที่ 14-15 มิถุนายน 2560 และ 20 มิถุนายน 2561 ในรูปแบบบล็อกแบบสุ่มที่สมบูรณ์พร้อมการจำลองการทดลองสองครั้งในแต่ละกรณีการทดลองปลูกในแถวเดี่ยว 1.8 ม. แถวกว้าง 0.9 ม. ใช้ 10 เมล็ดต่อแปลงมีการปลูกแถวเส้นขอบสองแถวรอบๆ ขอบของการทดลองแต่ละครั้งเพื่อป้องกันผลกระทบจากขอบการทดลองได้รับการปลูกเชื้อในวันที่ 20 กรกฎาคม 2017 และ 20 กรกฎาคม 2018 ซึ่งจุดที่ต้นข้าวฟ่างอยู่ในระยะการเจริญเติบโตที่ 3 การให้คะแนนจะดำเนินการในระดับ 1 ถึง 9 โดยที่พืชที่ไม่มีอาการของโรคจะได้รับคะแนนที่ 9 และสมบูรณ์ ต้นไม้ที่ตายแล้วจะถูกให้คะแนนเป็นหนึ่งเดียวมีการให้คะแนนสองครั้งในปี 2560 และการอ่านสี่ครั้งในปี 2561 โดยเริ่มตั้งแต่สองสัปดาห์หลังการฉีดวัคซีนในแต่ละปีsAUDPC (พื้นที่มาตรฐานภายใต้เส้นโค้งการลุกลามของโรค) คำนวณตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
เวลาโพสต์: Apr-01-2021