ผลเสริมฤทธิ์ของน้ำมันหอมระเหยต่อตัวเต็มวัยเพิ่มความเป็นพิษของเพอร์เมทรินต่อยุงลายบ้าน (Diptera: Culicidae)

ในโครงการก่อนหน้านี้ที่ทดสอบโรงงานแปรรูปอาหารท้องถิ่นในประเทศไทยเพื่อกำจัดยุง พบว่าน้ำมันหอมระเหย (EOs) จากต้นกก (Cyperus rotundus) ข่า และอบเชย มีฤทธิ์ต้านยุงลาย (Aedes aegypti) ได้ดี เพื่อลดการใช้ผลิตภัณฑ์แบบดั้งเดิมยาฆ่าแมลงและปรับปรุงการควบคุมประชากรยุงที่ดื้อยา การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อระบุศักยภาพการทำงานร่วมกันระหว่างผลการฆ่าตัวเต็มวัยของเอทิลีนออกไซด์และความเป็นพิษของเพอร์เมทรินต่อยุงลาย Aedes aegypti รวมถึงสายพันธุ์ที่ดื้อยาและไวต่อไพรีทรอยด์
เพื่อประเมินองค์ประกอบทางเคมีและฤทธิ์การฆ่าเชื้อของ EO ที่สกัดจากเหง้าของ C. rotundus และ A. galanga และเปลือกของ C. verum ต่อเชื้อสายพันธุ์เมืองเชียงใหม่ (MCM-S) ที่อ่อนแอ และเชื้อสายพันธุ์ปางไม้แดง (PMD-R) ที่ดื้อยา ยุง Ae. aegypti ที่โตเต็มวัยยังมีฤทธิ์อยู่ ได้ทำการทดสอบทางชีวภาพของสารผสม EO-permethrin ในยุง Aedes aegypti เหล่านี้ เพื่อศึกษาฤทธิ์เสริมฤทธิ์กันของสารนี้
การศึกษาคุณสมบัติทางเคมีโดยใช้วิธีวิเคราะห์ GC-MS พบว่าสามารถระบุสารประกอบได้ 48 ชนิดจากสาร EO ของ C. rotundus, A. galanga และ C. verum คิดเป็น 80.22%, 86.75% และ 97.24% ขององค์ประกอบทั้งหมดตามลำดับ ไซเพอรีน (14.04%), β-bisabolene (18.27%) และซินนามัลดีไฮด์ (64.66%) เป็นองค์ประกอบหลักของน้ำมัน cyperus, น้ำมันข่า และน้ำมัน balsamic ตามลำดับ ในการทดสอบการฆ่าเชื้อในผู้ใหญ่ทางชีวภาพ พบว่า EV ของ C. rotundus, A. galanga และ C. verum มีประสิทธิภาพในการฆ่าเชื้อ Ae. ค่า LD50 ของ Ae aegypti, MCM-S และ PMD-R เท่ากับ 10.05 และ 9.57 ไมโครกรัมต่อมิลลิกรัมในตัวเมีย, 7.97 และ 7.94 ไมโครกรัมต่อมิลลิกรัมในตัวเมีย และ 3.30 และ 3.22 ไมโครกรัมต่อมิลลิกรัมในตัวเมีย ตามลำดับ ประสิทธิภาพของ MCM-S และ PMD-R Ae ในการฆ่าตัวเต็มวัย Ae aegypti ใน EOs เหล่านี้ใกล้เคียงกับ piperonyl butoxide (ค่า PBO, LD50 = 6.30 และ 4.79 ไมโครกรัมต่อมิลลิกรัมในตัวเมีย ตามลำดับ) แต่ไม่เด่นชัดเท่า permethrin (ค่า LD50 = 0.44 และ 3.70 นาโนกรัม/มิลลิกรัมในตัวเมีย ตามลำดับ) อย่างไรก็ตาม การทดสอบทางชีวภาพแบบผสมพบการทำงานร่วมกันระหว่าง EO และ permethrin การทำงานร่วมกันอย่างมีนัยสำคัญของ permethrin กับยุง Aedes สองสายพันธุ์ พบ Aedes aegypti ใน EM ของ C. rotundus และ A. galanga การเติมน้ำมัน C. rotundus และ A. galanga ช่วยลดค่า LD50 ของ permethrin บน MCM-S ได้อย่างมีนัยสำคัญจาก 0.44 เป็น 0.07 ng/mg และ 0.11 ng/mg ในตัวเมียตามลำดับ โดยมีค่าอัตราส่วนการทำงานร่วมกัน (SR) ที่ 6.28 และ 4.00 ตามลำดับ นอกจากนี้ น้ำมันสกัดจาก C. rotundus และ A. galanga ยังช่วยลดค่า LD50 ของ permethrin บน PMD-R ได้อย่างมีนัยสำคัญจาก 3.70 เป็น 0.42 ng/mg และ 0.003 ng/mg ในตัวเมียตามลำดับ โดยมีค่า SR ที่ 8.81 และ 1233.33 ตามลำดับ
ผลเสริมฤทธิ์ของการใช้ EO-permethrin ร่วมกันเพื่อเพิ่มความเป็นพิษของยุง Aedes สองสายพันธุ์ในผู้ใหญ่ ยุง Aedes aegypti แสดงให้เห็นถึงบทบาทสำคัญของเอทิลีนออกไซด์ในฐานะตัวเสริมฤทธิ์ในการเพิ่มประสิทธิภาพในการป้องกันยุง โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีที่สารประกอบแบบดั้งเดิมไม่ได้ผลหรือไม่เหมาะสม
ยุงลายบ้าน (Aedes aegypti, Diptera: Culicidae) เป็นพาหะนำโรคไข้เลือดออกและโรคติดเชื้อไวรัสอื่นๆ เช่น ไข้เหลือง ไข้ชิคุนกุนยา และไวรัสซิกา ซึ่งเป็นภัยคุกคามร้ายแรงและต่อเนื่องต่อมนุษย์[1, 2] ไวรัสไข้เลือดออกเป็นไข้เลือดออกชนิดรุนแรงที่สุดที่ส่งผลกระทบต่อมนุษย์ โดยมีผู้ป่วยประมาณ 5-100 ล้านรายต่อปี และประชากรมากกว่า 2.5 พันล้านคนทั่วโลกตกอยู่ในความเสี่ยง[3] การระบาดของโรคติดเชื้อนี้สร้างภาระอันใหญ่หลวงให้กับประชากร ระบบสาธารณสุข และเศรษฐกิจของประเทศในเขตร้อนส่วนใหญ่ [1] กระทรวงสาธารณสุขของไทยรายงานว่ามีผู้ป่วยไข้เลือดออก 142,925 ราย และมีผู้เสียชีวิต 141 รายทั่วประเทศในปี พ.ศ. 2558 ซึ่งมากกว่าจำนวนผู้ป่วยและผู้เสียชีวิตในปี พ.ศ. 2557 ถึงสามเท่า [4] แม้จะมีหลักฐานทางประวัติศาสตร์ แต่ยุงลายบ้านก็สามารถกำจัดหรือลดจำนวนไข้เลือดออกได้อย่างมาก หลังจากการควบคุมยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) [5] อัตราการติดเชื้อเพิ่มขึ้นอย่างมากและโรคแพร่กระจายไปทั่วโลก ส่วนหนึ่งเป็นผลมาจากภาวะโลกร้อนหลายทศวรรษ การกำจัดและควบคุมยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) ค่อนข้างยากลำบาก เนื่องจากเป็นยุงพาหะนำโรคที่ผสมพันธุ์ หาอาหาร พักผ่อน และวางไข่ในและรอบๆ ที่อยู่อาศัยของมนุษย์ในเวลากลางวัน นอกจากนี้ ยุงลายบ้านยังมีความสามารถในการปรับตัวให้เข้ากับการเปลี่ยนแปลงของสภาพแวดล้อมหรือการรบกวนที่เกิดจากเหตุการณ์ทางธรรมชาติ (เช่น ภัยแล้ง) หรือมาตรการควบคุมโดยมนุษย์ และสามารถกลับคืนสู่จำนวนเดิมได้ [6, 7] เนื่องจากวัคซีนป้องกันโรคไข้เลือดออกเพิ่งได้รับการอนุมัติเมื่อไม่นานมานี้ และยังไม่มีวิธีการรักษาเฉพาะสำหรับโรคไข้เลือดออก การป้องกันและลดความเสี่ยงของการแพร่เชื้อไข้เลือดออกจึงขึ้นอยู่กับการควบคุมยุงพาหะนำโรคและการกำจัดการสัมผัสของมนุษย์กับยุงพาหะนำโรคเท่านั้น
โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การใช้สารเคมีเพื่อควบคุมยุงในปัจจุบันมีบทบาทสำคัญในด้านสาธารณสุข ในฐานะองค์ประกอบสำคัญของการจัดการพาหะแบบบูรณาการอย่างครอบคลุม วิธีการทางเคมีที่ได้รับความนิยมมากที่สุด ได้แก่ การใช้ยาฆ่าแมลงที่มีพิษต่ำซึ่งออกฤทธิ์ต่อลูกน้ำยุง (สารกำจัดลูกน้ำ) และยุงตัวเต็มวัย (อะดิโดไซด์) การควบคุมลูกน้ำยุงโดยการลดแหล่งกำเนิดและการใช้สารเคมีกำจัดลูกน้ำยุงอย่างสม่ำเสมอ เช่น ออร์กาโนฟอสเฟตและสารควบคุมการเจริญเติบโตของแมลง ถือเป็นสิ่งสำคัญ อย่างไรก็ตาม ผลกระทบต่อสิ่งแวดล้อมที่ไม่พึงประสงค์ที่เกี่ยวข้องกับสารกำจัดศัตรูพืชสังเคราะห์ รวมถึงการใช้แรงงานจำนวนมากและการบำรุงรักษาที่ซับซ้อนยังคงเป็นข้อกังวลหลัก [8, 9] การควบคุมพาหะนำโรคแบบแอคทีฟแบบดั้งเดิม เช่น การควบคุมตัวเต็มวัย ยังคงเป็นวิธีการควบคุมที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดในช่วงการระบาดของไวรัส เนื่องจากสามารถกำจัดพาหะนำโรคติดเชื้อได้อย่างรวดเร็วและในวงกว้าง รวมถึงลดอายุขัยและอายุขัยของประชากรพาหะนำโรคในท้องถิ่น [3] , 10] สารกำจัดแมลงเคมีสี่ประเภท ได้แก่ ออร์กาโนคลอรีน (เรียกสั้นๆ ว่า ดีดีที) ออร์กาโนฟอสเฟต คาร์บาเมต และไพรีทรอยด์ เป็นพื้นฐานของโครงการควบคุมแมลงพาหะ โดยไพรีทรอยด์ถือเป็นกลุ่มที่ประสบความสำเร็จมากที่สุด มีประสิทธิภาพสูงในการกำจัดสัตว์ขาปล้องหลายชนิด แต่มีประสิทธิภาพต่ำ เป็นพิษต่อสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ปัจจุบัน ไพรีทรอยด์สังเคราะห์เป็นสารกำจัดแมลงเชิงพาณิชย์ส่วนใหญ่ คิดเป็นประมาณ 25% ของตลาดสารกำจัดแมลงทั่วโลก [11, 12] เพอร์เมทรินและเดลตาเมทรินเป็นสารกำจัดแมลงไพรีทรอยด์แบบกว้างสเปกตรัมที่ใช้ทั่วโลกมานานหลายทศวรรษเพื่อควบคุมแมลงศัตรูพืชหลากหลายชนิดที่มีความสำคัญทางการเกษตรและทางการแพทย์ [13, 14] ในช่วงทศวรรษ 1950 ดีดีทีได้รับเลือกให้เป็นสารเคมีที่เลือกใช้ในโครงการควบคุมยุงเพื่อสาธารณสุขแห่งชาติของประเทศไทย หลังจากการใช้ดีดีทีอย่างแพร่หลายในพื้นที่ที่มีการระบาดของมาลาเรีย ประเทศไทยได้ค่อยๆ ยกเลิกการใช้ดีดีทีระหว่างปี พ.ศ. 2538 ถึง พ.ศ. 2543 และแทนที่ด้วยสารไพรีทรอยด์สองชนิด ได้แก่ เพอร์เมทรินและเดลตาเมทริน [15, 16] ยาฆ่าแมลงไพรีทรอยด์เหล่านี้ถูกนำมาใช้ในช่วงต้นทศวรรษ 1990 เพื่อควบคุมมาลาเรียและไข้เลือดออก โดยส่วนใหญ่ใช้มุ้งคลุมเตียง การใช้หมอกความร้อน และสเปรย์ฉีดพ่นที่มีความเป็นพิษต่ำมาก [14, 17] อย่างไรก็ตาม ยาเหล่านี้ได้สูญเสียประสิทธิภาพเนื่องจากความต้านทานยุงสูงและการที่ประชาชนไม่ปฏิบัติตามข้อกำหนด เนื่องจากความกังวลเกี่ยวกับสุขภาพของประชาชนและผลกระทบต่อสิ่งแวดล้อมจากสารเคมีสังเคราะห์ สิ่งนี้เป็นความท้าทายสำคัญต่อความสำเร็จของโครงการควบคุมพาหะนำโรค [14, 18, 19] เพื่อให้กลยุทธ์มีประสิทธิภาพมากขึ้น จำเป็นต้องมีมาตรการรับมือที่เหมาะสมและทันท่วงที ขั้นตอนการจัดการที่แนะนำประกอบด้วยการทดแทนสารธรรมชาติ การหมุนเวียนสารเคมีประเภทต่างๆ การเติมสารเสริมฤทธิ์ และการผสมสารเคมีหรือการใช้สารเคมีประเภทต่างๆ พร้อมกัน [14, 20, 21] ดังนั้น จึงมีความจำเป็นเร่งด่วนในการค้นหาและพัฒนาทางเลือกและสารเสริมฤทธิ์ที่เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อม สะดวก และมีประสิทธิภาพ และการศึกษานี้มุ่งเป้าไปที่การตอบสนองความต้องการนี้
สารกำจัดแมลงจากธรรมชาติ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสารที่มีส่วนผสมของพืช แสดงให้เห็นถึงศักยภาพในการประเมินทางเลือกในการควบคุมยุงทั้งในปัจจุบันและอนาคต [22, 23, 24] งานวิจัยหลายชิ้นแสดงให้เห็นว่าเป็นไปได้ที่จะควบคุมยุงพาหะนำโรคที่สำคัญได้โดยการใช้ผลิตภัณฑ์จากพืช โดยเฉพาะน้ำมันหอมระเหย (EOs) เป็นสารฆ่ายุงตัวเต็มวัย คุณสมบัติในการกำจัดยุงตัวเต็มวัยพบได้ในน้ำมันพืชหลายชนิด เช่น ขึ้นฉ่าย ยี่หร่า ยี่หร่าขาว โป๊ยกั๊ก พริกหวาน ไทม์ ชินัส เทเรบินทิโฟเลีย ซิมโบโพกอน ซิตรัตัส ซิมโบโพกอน โชเอนทัส ซิมโบโพกอน กิกันเตอัส เชโนโพเดียม แอมโบรซิโอไดส์ คูโคลสเปิร์ม แพลนโชนี อี ยูคาลิปตัส เทอร์ เอทิคอร์นิส ยูคาลิปตัส ซิตริโอโดรา แคงกาโอโดราตา และเปโตรเซลินัม คริสคัม [25,26,27,28,29,30] ปัจจุบันมีการใช้เอทิลีนออกไซด์ไม่เพียงแต่โดยลำพัง แต่ยังใช้ร่วมกับสารสกัดจากพืชหรือยาฆ่าแมลงสังเคราะห์ที่มีอยู่เดิม ซึ่งก่อให้เกิดความเป็นพิษในระดับที่แตกต่างกัน การผสมยาฆ่าแมลงแบบดั้งเดิม เช่น ออร์กาโนฟอสเฟต คาร์บาเมต และไพรีทรอยด์ เข้ากับเอทิลีนออกไซด์/สารสกัดจากพืช มีฤทธิ์เป็นพิษทั้งแบบเสริมฤทธิ์และแบบต่อต้าน และได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประสิทธิภาพในการกำจัดพาหะนำโรคและแมลงศัตรูพืช [31,32,33,34,35] อย่างไรก็ตาม การศึกษาส่วนใหญ่เกี่ยวกับฤทธิ์เป็นพิษแบบเสริมฤทธิ์ของการใช้สารไฟโตเคมิคอลร่วมกับหรือไม่มีสารเคมีสังเคราะห์กับแมลงศัตรูพืชและแมลงศัตรูพืช มักดำเนินการกับแมลงพาหะนำโรคและแมลงศัตรูพืชทางการเกษตร มากกว่ายุงที่มีความสำคัญทางการแพทย์ นอกจากนี้ งานวิจัยส่วนใหญ่เกี่ยวกับฤทธิ์เสริมฤทธิ์ของการใช้สารกำจัดแมลงสังเคราะห์ร่วมกับพืชต่อยุงพาหะนำโรคยังมุ่งเน้นไปที่ฤทธิ์ในการกำจัดลูกน้ำยุงอีกด้วย
จากการศึกษาก่อนหน้านี้ที่ดำเนินการโดยผู้เขียน ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของโครงการวิจัยที่กำลังดำเนินการอยู่ ซึ่งคัดกรองสารกำจัดแมลงศัตรูพืชจากพืชอาหารพื้นเมืองในประเทศไทย พบว่าเอทิลีนออกไซด์จากต้นกก (Cyperus rotundus) ข่า และอบเชย มีฤทธิ์ต้านยุงลาย (Aedes aegypti) ตัวเต็มวัย [36] ดังนั้น การศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินประสิทธิภาพของเอทิลีนออกไซด์ที่แยกได้จากพืชสมุนไพรเหล่านี้ต่อยุงลาย (Aedes aegypti) รวมถึงสายพันธุ์ที่ต้านทานและไวต่อไพรีทรอยด์ ได้มีการวิเคราะห์ผลเสริมฤทธิ์กันของเอทิลีนออกไซด์และไพรีทรอยด์สังเคราะห์ที่มีประสิทธิภาพดีในยุงลายตัวเต็มวัย เพื่อลดการใช้ยาฆ่าแมลงแบบดั้งเดิมและเพิ่มความต้านทานต่อยุงพาหะ โดยเฉพาะอย่างยิ่งต่อยุงลาย (Aedes aegypti) บทความนี้รายงานลักษณะทางเคมีของน้ำมันหอมระเหยที่มีประสิทธิภาพและศักยภาพในการเพิ่มความเป็นพิษของเพอร์เมทรินสังเคราะห์ต่อยุงลาย (Aedes aegypti) ในสายพันธุ์ที่ไวต่อไพรีทรอยด์ (MCM-S) และสายพันธุ์ที่ดื้อต่อไพรีทรอยด์ (PMD-R)
เหง้าของ C. rotundus และ A. galanga และเปลือกของ C. verum (รูปที่ 1) ที่ใช้ในการสกัดน้ำมันหอมระเหย ได้รับการสั่งซื้อจากผู้จำหน่ายยาสมุนไพรในจังหวัดเชียงใหม่ ประเทศไทย การระบุชนิดทางวิทยาศาสตร์ของพืชเหล่านี้ได้สำเร็จโดยการปรึกษาหารือกับนายเจมส์ แฟรงคลิน แม็กซ์เวลล์ นักพฤกษศาสตร์สมุนไพร ภาควิชาชีววิทยา วิทยาลัยวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยเชียงใหม่ (CMU) จังหวัดเชียงใหม่ ประเทศไทย และนักวิทยาศาสตร์ วรรณรี เจริญทรัพย์ ณ ภาควิชาเภสัชกรรม วิทยาลัยเภสัชศาสตร์ มหาวิทยาลัยคาร์เนกีเมลลอน คุณสุรสิทธิ์ ตัวอย่างใบสำคัญของแต่ละพืชถูกเก็บรักษาไว้ที่ภาควิชาปรสิตวิทยา คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยคาร์เนกีเมลลอน เพื่อใช้งานในอนาคต
ตัวอย่างพืชแต่ละชนิดถูกนำไปตากแห้งในที่ร่มเป็นเวลา 3-5 วัน ในพื้นที่เปิดโล่งที่มีการระบายอากาศที่ดี และอุณหภูมิโดยรอบประมาณ 30 ± 5 °C เพื่อกำจัดความชื้นก่อนการสกัดน้ำมันหอมระเหยธรรมชาติ (EOs) วัตถุดิบพืชแห้งแต่ละชนิดน้ำหนักรวม 250 กรัม ถูกบดด้วยเครื่องจักรให้เป็นผงหยาบ และนำไปใช้แยกน้ำมันหอมระเหย (EOs) โดยการกลั่นด้วยไอน้ำ เครื่องกลั่นประกอบด้วยชั้นทำความร้อนไฟฟ้า ขวดก้นกลมขนาด 3,000 มล. คอลัมน์สกัด คอนเดนเซอร์ และอุปกรณ์ Cool ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) เติมน้ำกลั่น 1,600 มล. และลูกปัดแก้ว 10-15 เม็ดลงในขวด จากนั้นให้ความร้อนจนถึงอุณหภูมิประมาณ 100°C โดยใช้เครื่องทำความร้อนไฟฟ้าเป็นเวลาอย่างน้อย 3 ชั่วโมง จนกระทั่งการกลั่นเสร็จสิ้นและไม่มี EOs เหลืออยู่ แยกชั้น EO ออกจากเฟสน้ำโดยใช้กรวยแยก ทำให้แห้งด้วยโซเดียมซัลเฟตปราศจากน้ำ (Na2SO4) และเก็บไว้ในขวดสีน้ำตาลที่ปิดสนิทที่อุณหภูมิ 4°C จนกว่าจะตรวจสอบองค์ประกอบทางเคมีและกิจกรรมของตัวเต็มวัย
ได้ทำการศึกษาองค์ประกอบทางเคมีของน้ำมันหอมระเหยพร้อมกับการทดสอบทางชีวภาพของสารที่โตเต็มวัย การวิเคราะห์เชิงคุณภาพดำเนินการโดยใช้ระบบ GC-MS ซึ่งประกอบด้วยเครื่องแก๊สโครมาโทกราฟ Hewlett-Packard (Wilmington, CA, USA) รุ่น 7890A ที่ติดตั้งตัวตรวจวัดแบบเลือกมวลแบบควอดรูโพลตัวเดียว (Agilent Technologies, Wilmington, CA, USA) และ MSD 5975C (EI) (Agilent Technologies)
คอลัมน์โครมาโทกราฟี – DB-5MS (30 ม. × เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 0.25 มม. × ความหนาฟิล์ม 0.25 ไมโครเมตร) ระยะเวลาการทำงานของ GC-MS ทั้งหมดคือ 20 นาที เงื่อนไขการวิเคราะห์คือ อุณหภูมิของหัวฉีดและสายถ่ายโอนอยู่ที่ 250 และ 280 องศาเซลเซียส ตามลำดับ อุณหภูมิของเตาเผาถูกตั้งค่าให้เพิ่มจาก 50 องศาเซลเซียสเป็น 250 องศาเซลเซียส ที่อัตรา 10 องศาเซลเซียสต่อนาที ก๊าซพาหะคือฮีเลียม อัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตรต่อนาที ปริมาตรที่ฉีดคือ 0.2 ไมโครลิตร (1/10% โดยปริมาตรใน CH2Cl2 อัตราส่วนการแยก 100:1) ระบบอิออนไนเซชันอิเล็กตรอนที่มีพลังงานอิออนไนเซชัน 70 อิเล็กตรอนโวลต์ใช้สำหรับการตรวจจับ GC-MS ช่วงการรับข้อมูลคือ 50–550 หน่วยมวลอะตอม (amu) และความเร็วในการสแกนคือ 2.91 ครั้งต่อวินาที ร้อยละสัมพัทธ์ของส่วนประกอบแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ที่ปรับมาตรฐานตามพื้นที่พีค การระบุส่วนประกอบของ EO ขึ้นอยู่กับดัชนีการคงอยู่ (RI) RI คำนวณโดยใช้สมการของ Van den Dool และ Kratz [37] สำหรับกลุ่ม n-alkanes (C8-C40) และเปรียบเทียบกับดัชนีการคงอยู่จากเอกสารอ้างอิง [38] และฐานข้อมูลห้องสมุด (NIST 2008 และ Wiley 8NO8) เอกลักษณ์ของสารประกอบที่แสดง เช่น โครงสร้างและสูตรโมเลกุล ได้รับการยืนยันโดยการเปรียบเทียบกับตัวอย่างจริงที่มีอยู่
มาตรฐานการวิเคราะห์สำหรับสารเพอร์เมทรินสังเคราะห์และไพเพอโรนิลบิวทอกไซด์ (PBO, ตัวควบคุมเชิงบวกในการศึกษาฤทธิ์เสริมฤทธิ์) จัดซื้อจากบริษัทซิกมา-อัลดริช (เซนต์หลุยส์ รัฐมิสซูรี สหรัฐอเมริกา) ชุดตรวจสำหรับผู้ใหญ่ขององค์การอนามัยโลก (WHO) และกระดาษชุบเพอร์เมทริน (0.75%) สำหรับการวินิจฉัยโรค จัดซื้อจากศูนย์ควบคุมพาหะนำโรคขององค์การอนามัยโลก (WHO) ในปีนัง ประเทศมาเลเซีย สารเคมีและสารรีเอเจนต์อื่นๆ ทั้งหมดที่ใช้เป็นเกรดวิเคราะห์ และจัดซื้อจากสถาบันในท้องถิ่นในจังหวัดเชียงใหม่ ประเทศไทย
ยุงที่ใช้เป็นสิ่งมีชีวิตทดสอบในการทดสอบทางชีวภาพตัวเต็มวัยเป็นยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) ในห้องปฏิบัติการที่ผสมพันธุ์กันได้อย่างอิสระ ซึ่งรวมถึงสายพันธุ์เมืองเชียงใหม่ที่อ่อนแอ (MCM-S) และสายพันธุ์ปางไม้แดงที่ดื้อยา (PMD-R) สายพันธุ์ MCM-S ได้มาจากตัวอย่างในพื้นที่ที่เก็บรวบรวมในพื้นที่เมืองเชียงใหม่ จังหวัดเชียงใหม่ ประเทศไทย และได้รับการดูแลรักษาในห้องกีฏวิทยาของภาควิชาปรสิตวิทยา คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยเชียงใหม่ ตั้งแต่ปี พ.ศ. 2538 [39] สายพันธุ์ PMD-R ซึ่งพบว่าดื้อต่อเพอร์เมทริน ได้รับการแยกจากยุงทุ่งที่เก็บมาจากบ้านปางไม้แดง อำเภอแม่แตง จังหวัดเชียงใหม่ ประเทศไทย และได้รับการดูแลรักษาที่สถาบันเดียวกันตั้งแต่ปี พ.ศ. 2540 [40] สายพันธุ์ PMD-R ได้รับการเพาะเลี้ยงภายใต้แรงกดดันแบบคัดเลือกเพื่อรักษาระดับความต้านทานโดยการสัมผัสกับเพอร์เมทริน 0.75% เป็นระยะๆ โดยใช้ชุดตรวจของ WHO ที่มีการดัดแปลงบางอย่าง [41] สายพันธุ์ของ Ae. แต่ละสายพันธุ์ ยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) ถูกเพาะพันธุ์แยกกันในห้องปฏิบัติการปลอดเชื้อที่อุณหภูมิ 25 ± 2 องศาเซลเซียส ความชื้นสัมพัทธ์ 80 ± 10% และช่วงแสงที่สว่าง/มืด 14:10 ชั่วโมง ตัวอ่อนประมาณ 200 ตัวถูกเลี้ยงในถาดพลาสติก (ยาว 33 ซม. กว้าง 28 ซม. และสูง 9 ซม.) บรรจุน้ำประปาที่มีความหนาแน่น 150–200 ตัวต่อถาด และให้อาหารวันละสองครั้งด้วยบิสกิตสุนัขที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว หนอนตัวเต็มวัยถูกเลี้ยงในกรงที่ชื้นและให้อาหารอย่างต่อเนื่องด้วยสารละลายซูโครส 10% และน้ำเชื่อมวิตามินรวม 10% ยุงตัวเมียดูดเลือดเพื่อวางไข่เป็นประจำ ยุงตัวเมียอายุ 2-5 วันที่ยังไม่ได้รับเลือดสามารถนำไปใช้ในการทดลองทางชีวภาพของตัวเต็มวัยได้อย่างต่อเนื่อง
ได้ทำการทดสอบทางชีวภาพเกี่ยวกับการตอบสนองต่อการตายด้วยปริมาณยาของ EO ในยุงลายบ้าน (Aedes aegypti), MCM-S และ PMD-R โดยใช้วิธีทาภายนอกที่ปรับเปลี่ยนตามพิธีสารมาตรฐานขององค์การอนามัยโลกสำหรับการทดสอบความไว [42] EO จากพืชแต่ละชนิดถูกเจือจางด้วยตัวทำละลายที่เหมาะสม (เช่น เอทานอลหรืออะซิโตน) เพื่อให้ได้ชุดความเข้มข้นที่ไล่ระดับ 4-6 ระดับ หลังจากการวางยาสลบด้วยคาร์บอนไดออกไซด์ (CO2) แล้ว ยุงจะถูกชั่งน้ำหนักทีละตัว จากนั้นยุงที่ถูกวางยาสลบจะถูกวางนิ่งบนกระดาษกรองแห้งบนแผ่นทำความเย็นแบบพิเศษภายใต้กล้องจุลทรรศน์สเตอริโอเพื่อป้องกันการกลับมาทำงานซ้ำในระหว่างขั้นตอน สำหรับการรักษาแต่ละครั้ง สารละลาย EO ปริมาณ 0.1 ไมโครลิตรถูกทาลงบนส่วน pronotum ส่วนบนของยุงตัวเมียโดยใช้เครื่องจ่ายไมโครแบบมือถือ Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, USA) ยุงตัวเมียจำนวน 25 ตัวได้รับการรักษาด้วยความเข้มข้นแต่ละระดับ โดยมีอัตราการตายตั้งแต่ 10% ถึง 95% ในความเข้มข้นที่แตกต่างกันอย่างน้อย 4 ระดับ ยุงที่ได้รับการรักษาด้วยตัวทำละลายเป็นตัวควบคุม เพื่อป้องกันการปนเปื้อนของตัวอย่างทดสอบ ให้เปลี่ยนกระดาษกรองใหม่สำหรับแต่ละ EO ที่ทดสอบ ปริมาณที่ใช้ในการทดลองทางชีวภาพเหล่านี้แสดงเป็นไมโครกรัมของ EO ต่อมิลลิกรัมของน้ำหนักตัวตัวเมียที่มีชีวิต กิจกรรมของ PBO ในผู้ใหญ่ก็ได้รับการประเมินในลักษณะเดียวกับ EO โดยใช้ PBO เป็นตัวควบคุมเชิงบวกในการทดลองแบบเสริมฤทธิ์ ยุงที่ได้รับการบำบัดในทุกกลุ่มถูกใส่ในถ้วยพลาสติกและให้ซูโครส 10% ร่วมกับน้ำเชื่อมมัลติวิตามิน 10% การทดสอบทางชีวภาพทั้งหมดดำเนินการที่อุณหภูมิ 25 ± 2 °C และความชื้นสัมพัทธ์ 80 ± 10% และทำซ้ำสี่ครั้งกับกลุ่มควบคุม อัตราการตายของยุงในช่วง 24 ชั่วโมงที่เลี้ยงได้รับการตรวจสอบและยืนยันโดยการไม่ตอบสนองต่อการกระตุ้นเชิงกลของยุง จากนั้นบันทึกโดยใช้ค่าเฉลี่ยของสี่ซ้ำ การทดลองซ้ำสี่ครั้งสำหรับแต่ละตัวอย่างโดยใช้ยุงชุดต่างๆ ผลการทดลองถูกสรุปและนำไปใช้คำนวณเปอร์เซ็นต์อัตราการตาย ซึ่งใช้ในการกำหนดปริมาณยาที่ทำให้ถึงตายภายใน 24 ชั่วโมงโดยการวิเคราะห์โปรบิต
ประเมินฤทธิ์ต้านการก่อโรคที่เสริมฤทธิ์กันของ EO และเพอร์เมทรินโดยใช้ขั้นตอนการทดสอบความเป็นพิษเฉพาะที่ [42] ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ใช้อะซิโตนหรือเอทานอลเป็นตัวทำละลายเพื่อเตรียมเพอร์เมทรินที่ความเข้มข้นที่ต้องการ รวมถึงส่วนผสมของ EO และเพอร์เมทริน (EO-เพอร์เมทริน: เพอร์เมทรินผสมกับ EO ที่ความเข้มข้น LD25) ชุดทดสอบ (เพอร์เมทรินและ EO-เพอร์เมทริน) ได้รับการประเมินเทียบกับยุง Ae. Aedes aegypti สายพันธุ์ MCM-S และ PMD-R ยุงตัวเมีย 25 ตัวได้รับเพอร์เมทริน 4 ครั้งเพื่อทดสอบประสิทธิภาพในการฆ่าตัวเต็มวัย โดยแต่ละครั้งให้ทำซ้ำ 4 ครั้ง เพื่อค้นหายุงที่มีฤทธิ์เสริมฤทธิ์กันของ EO ได้ให้ EO-เพอร์เมทริน 4 ถึง 6 ครั้งกับยุงตัวเมีย 25 ตัว โดยแต่ละครั้งให้ทำซ้ำ 4 ครั้ง การรักษาด้วย PBO-เพอร์เมทริน (เพอร์เมทรินผสมกับ PBO ที่ความเข้มข้น LD25) ก็ใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกเช่นกัน ปริมาณยาที่ใช้ในการทดลองทางชีวภาพเหล่านี้แสดงเป็นนาโนกรัมของตัวอย่างทดสอบต่อมิลลิกรัมของน้ำหนักตัวตัวเมียที่มีชีวิต มีการประเมินการทดลองสี่ครั้งสำหรับยุงแต่ละสายพันธุ์โดยทำการทดลองแยกกันเป็นกลุ่ม และรวบรวมข้อมูลการเสียชีวิตและวิเคราะห์โดยใช้ Probit เพื่อกำหนดปริมาณยาที่ทำให้เสียชีวิตภายใน 24 ชั่วโมง
อัตราการเสียชีวิตได้รับการปรับโดยใช้สูตรของ Abbott [43] ข้อมูลที่ปรับแล้วถูกวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์การถดถอยแบบ Probit โดยใช้โปรแกรมสถิติคอมพิวเตอร์ SPSS (เวอร์ชัน 19.0) ค่าที่ทำให้เสียชีวิต 25%, 50%, 90%, 95% และ 99% (LD25, LD50, LD90, LD95 และ LD99 ตามลำดับ) คำนวณโดยใช้ช่วงความเชื่อมั่น 95% ที่สอดคล้องกัน (95% CI) การวัดนัยสำคัญและความแตกต่างระหว่างตัวอย่างทดสอบถูกประเมินโดยใช้การทดสอบไคสแควร์หรือการทดสอบ Mann-Whitney U ในการทดสอบทางชีวภาพแต่ละครั้ง ผลการทดลองถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติที่ P< 0.05 ค่าสัมประสิทธิ์ความต้านทาน (RR) จะถูกประมาณที่ระดับ LD50 โดยใช้สูตรต่อไปนี้ [12]:
RR > 1 หมายถึงความต้านทาน และ RR ≤ 1 หมายถึงความไว ค่าอัตราส่วนซินเนอร์จี (SR) ของสารเสริมฤทธิ์แต่ละตัวคำนวณได้ดังนี้ [34, 35, 44]
ปัจจัยนี้แบ่งผลลัพธ์ออกเป็นสามประเภท: ค่า SR ที่ 1±0.05 ถือว่าไม่มีผลชัดเจน ค่า SR ที่ >1.05 ถือว่ามีผลเสริมฤทธิ์กัน และค่า SR ของ A น้ำมันเหลวสีเหลืองอ่อนสามารถรับได้โดยการกลั่นด้วยไอน้ำของเหง้าของ C. rotundus และ A. galanga และเปลือกของ C. verum ผลผลิตที่คำนวณจากน้ำหนักแห้งคือ 0.15%, 0.27% (w/w) และ 0.54% (v/v) w) ตามลำดับ (ตารางที่ 1) การศึกษาองค์ประกอบทางเคมีของน้ำมันของ C. rotundus, A. galanga และ C. verum โดย GC-MS แสดงให้เห็นว่ามีสารประกอบ 19, 17 และ 21 ชนิด ซึ่งคิดเป็น 80.22, 86.75 และ 97.24% ของส่วนประกอบทั้งหมดตามลำดับ (ตารางที่ 2) สารประกอบน้ำมันเหง้าของ C. lucidum ประกอบด้วยไซเพอโรนีนเป็นหลัก (14.04%) รองลงมาคือคาร์ราลีน (9.57%) อัลฟา-แคปเซลแลน (7.97%) และอัลฟา-แคปเซลแลน (7.53%) ส่วนประกอบทางเคมีหลักของน้ำมันเหง้าข่าคือ β-bisabolene (18.27%) รองลงมาคือ α-bergamotene (16.28%) 1,8-cineole (10.17%) และ piperonol (10.09%) ในขณะที่ซินนามัลดีไฮด์ (64.66%) ถูกระบุว่าเป็นส่วนประกอบหลักของน้ำมันเปลือก C. verum ซินนามิกอะซิเตต (6.61%) อัลฟา-โคเพน (5.83%) และ 3-phenylpropionaldehyde (4.09%) ถือเป็นส่วนประกอบรอง โครงสร้างทางเคมีของไซเพิร์น β-บิซาโบลีน และซินนามัลดีไฮด์เป็นสารประกอบหลักของ C. rotundus, A. galanga และ C. verum ตามลำดับ ดังที่แสดงในรูปที่ 2
ผลจาก OOs สามตัวที่ประเมินกิจกรรมของตัวเต็มวัยต่อยุงลาย Aedes ยุงลาย aegypti แสดงอยู่ในตารางที่ 3 พบว่า EO ทั้งหมดมีผลร้ายแรงต่อยุงลาย Aedes MCM-S ในชนิดและขนาดยาที่ต่างกัน Aedes aegypti EO ที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดคือ C. verum รองลงมาคือ A. galanga และ C. rotundus โดยมีค่า LD50 เท่ากับ 3.30, 7.97 และ 10.05 μg/mg MCM-S ในตัวเมียตามลำดับ สูงกว่า 3.22 เล็กน้อย (U = 1 ), Z = -0.775, P = 0.667), 7.94 (U = 2, Z = 0, P = 1) และ 9.57 (U = 0, Z = -1.549, P = 0.333) μg/mg PMD -R ในผู้หญิง สิ่งนี้สอดคล้องกับการที่ PBO มีผลต่อ PMD-R ในผู้ใหญ่ที่สูงกว่าสายพันธุ์ MSM-S เล็กน้อย โดยมีค่า LD50 ที่ 4.79 และ 6.30 μg/mg ในตัวเมียตามลำดับ (U = 0, Z = -2.021, P = 0.057 ) ) สามารถคำนวณได้ว่าค่า LD50 ของ C. verum, A. galanga, C. rotundus และ PBO ต่อ PMD-R ต่ำกว่าค่า LD50 ของ MCM-S ประมาณ 0.98, 0.99, 0.95 และ 0.76 เท่าตามลำดับ ดังนั้น นี่จึงบ่งชี้ว่าความไวต่อ PBO และ EO นั้นค่อนข้างใกล้เคียงกันระหว่างยุงลายสองสายพันธุ์ แม้ว่า PMD-R จะไวกว่า MCM-S แต่ความไวของยุงลาย Aedes aegypti ไม่มีนัยสำคัญ ในทางตรงกันข้าม ยุงลายสองสายพันธุ์มีความแตกต่างกันอย่างมากในความไวต่อ permethrin. aegypti (ตารางที่ 4) PMD-R แสดงให้เห็นถึงความต้านทานต่อเพอร์เมทรินอย่างมีนัยสำคัญ (ค่า LD50 = 0.44 นาโนกรัม/มก. ในผู้หญิง) โดยมีค่า LD50 สูงกว่าที่ 3.70 เมื่อเทียบกับ MCM-S (ค่า LD50 = 0.44 นาโนกรัม/มก. ในผู้หญิง) นาโนกรัม/มก. ในผู้หญิง (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029) แม้ว่า PMD-R จะมีความไวต่อเพอร์เมทรินน้อยกว่า MCM-S มาก แต่ความไวต่อ PBO และน้ำมัน C. verum, A. galanga และ C. rotundus สูงกว่า MCM-S เล็กน้อย
จากการทดลองทางชีวภาพในประชากรผู้ใหญ่ของการผสม EO-permethrin พบว่าสารผสมสองชนิดคือ permethrin และ EO (LD25) แสดงให้เห็นถึงการทำงานร่วมกัน (ค่า SR > 1.05) หรือไม่มีผลใดๆ (ค่า SR = 1 ± 0.05) ผลกระทบที่ซับซ้อนของสารผสม EO-permethrin ในผู้ใหญ่ต่อยุงเผือกทดลอง ยุงลายบ้านสายพันธุ์ MCM-S และ PMD-R แสดงไว้ในตารางที่ 4 และรูปที่ 3 พบว่าการเติมน้ำมัน C. verum ช่วยลดค่า LD50 ของ permethrin เมื่อเทียบกับ MCM-S เล็กน้อย และเพิ่มค่า LD50 เมื่อเทียบกับ PMD-R เล็กน้อยเป็น 0.44–0.42 นาโนกรัม/มิลลิกรัมในผู้หญิง และจาก 3.70 เป็น 3.85 นาโนกรัม/มิลลิกรัมในผู้หญิงตามลำดับ ในทางตรงกันข้าม การเติมน้ำมัน C. rotundus และ A. galanga สามารถลดค่า LD50 ของ permethrin บน MCM-S ได้อย่างมีนัยสำคัญจาก 0.44 เหลือ 0.07 (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029) และเหลือ 0.11 (U = 0 ). , Z) = -2.309, P = 0.029) ng/mg ของผู้หญิง จากค่า LD50 ของ MCM-S ค่า SR ของส่วนผสม EO-permethrin หลังจากเติมน้ำมัน C. rotundus และ A. galanga เท่ากับ 6.28 และ 4.00 ตามลำดับ ดังนั้น ค่า LD50 ของเพอร์เมทรินต่อ PMD-R จึงลดลงอย่างมีนัยสำคัญจาก 3.70 เหลือ 0.42 (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029) และเหลือ 0.003 เมื่อเติมน้ำมัน C. rotundus และ A. galanga (U = 0 ), Z = -2.337, P = 0.029) ng/mg ตัวเมีย ค่า SR ของเพอร์เมทรินร่วมกับ C. rotundus ต่อ PMD-R เท่ากับ 8.81 ในขณะที่ค่า SR ของสารผสม galangal-permethrin เท่ากับ 1233.33 เมื่อเทียบกับ MCM-S ค่า LD50 ของ PBO ตัวควบคุมบวกลดลงจาก 0.44 เป็น 0.26 ng/mg (ตัวเมีย) และจาก 3.70 ng/mg (ตัวเมีย) เป็น 0.65 ng/mg (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029) และ PMD-R (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029) ค่า SR ของส่วนผสม PBO-permethrin สำหรับสายพันธุ์ MCM-S และ PMD-R เท่ากับ 1.69 และ 5.69 ตามลำดับ ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าน้ำมัน C. rotundus และ A. galanga และ PBO เพิ่มความเป็นพิษของ permethrin ได้มากกว่าน้ำมัน C. verum สำหรับสายพันธุ์ MCM-S และ PMD-R
กิจกรรมของ EO, PBO, permethrin (PE) ในผู้ใหญ่ (LD50) และสารประกอบเหล่านี้ที่ต่อต้านสายพันธุ์ที่ไวต่อไพรีทรอยด์ (MCM-S) และดื้อยา (PMD-R) ของยุงลายบ้าน (Aedes aegypti)
[45] ไพรีทรอยด์สังเคราะห์ถูกใช้ทั่วโลกเพื่อควบคุมสัตว์ขาปล้องเกือบทั้งหมดที่มีความสำคัญทางการเกษตรและทางการแพทย์ อย่างไรก็ตาม เนื่องจากผลกระทบที่เป็นอันตรายจากการใช้ยาฆ่าแมลงสังเคราะห์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในแง่ของการพัฒนาและการดื้อยาของยุงอย่างกว้างขวาง รวมถึงผลกระทบต่อสุขภาพและสิ่งแวดล้อมในระยะยาว จึงมีความจำเป็นเร่งด่วนที่จะต้องลดการใช้ยาฆ่าแมลงสังเคราะห์แบบดั้งเดิมและพัฒนาทางเลือกอื่น [35, 46, 47] นอกจากการปกป้องสิ่งแวดล้อมและสุขภาพของมนุษย์แล้ว ข้อดีของยาฆ่าแมลงจากพืชยังรวมถึงการคัดเลือกสูง การเข้าถึงทั่วโลก และการผลิตและการใช้งานที่ง่าย ทำให้ยาฆ่าแมลงเหล่านี้น่าสนใจยิ่งขึ้นสำหรับการควบคุมยุง [32, 48, 49] การศึกษานี้ นอกจากการอธิบายลักษณะทางเคมีของน้ำมันหอมระเหยที่มีประสิทธิภาพผ่านการวิเคราะห์ GC-MS แล้ว ยังได้ประเมินศักยภาพของน้ำมันหอมระเหยจากตัวเต็มวัยและความสามารถในการเพิ่มความเป็นพิษของเพอร์เมทริน aegypti สังเคราะห์ในสายพันธุ์ที่ไวต่อไพรีทรอยด์ (MCM-S) และสายพันธุ์ที่ดื้อยา (PMD-R)
การวิเคราะห์ลักษณะเฉพาะของ GC-MS พบว่าไซเพิร์น (14.04%), β-บิซาโบลีน (18.27%) และซินนามัลดีไฮด์ (64.66%) เป็นองค์ประกอบหลักของน้ำมัน C. rotundus, A. galanga และ C. verum ตามลำดับ สารเคมีเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงฤทธิ์ทางชีวภาพที่หลากหลาย Ahn และคณะ [50] รายงานว่า 6-อะซีทอกซีไซเพอร์รีน ซึ่งแยกได้จากเหง้าของ C. rotundus ทำหน้าที่เป็นสารต้านเนื้องอกและสามารถเหนี่ยวนำให้เกิดอะพอพโทซิสที่ขึ้นอยู่กับคาสเปสในเซลล์มะเร็งรังไข่ β-บิซาโบลีน ซึ่งสกัดจากน้ำมันหอมระเหยของต้นมดยอบ มีฤทธิ์เป็นพิษต่อเซลล์มะเร็งเต้านมของมนุษย์และหนูอย่างจำเพาะทั้งในหลอดทดลองและในร่างกาย [51] มีรายงานว่าซินนามัลดีไฮด์ที่ได้จากสารสกัดจากธรรมชาติหรือสังเคราะห์ในห้องปฏิบัติการมีฤทธิ์ฆ่าแมลง ต้านแบคทีเรีย ต้านเชื้อรา ต้านการอักเสบ ปรับภูมิคุ้มกัน ต้านมะเร็ง และต้านการสร้างเส้นเลือดใหม่ [52]
ผลการทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพของสารออกฤทธิ์ในผู้ใหญ่ที่ขึ้นกับปริมาณยาแสดงให้เห็นถึงศักยภาพที่ดีของสาร EO ที่ทดสอบ และแสดงให้เห็นว่ายุงลายสายพันธุ์ MCM-S และ PMD-R มีความไวต่อ EO และ PBO ใกล้เคียงกัน การเปรียบเทียบประสิทธิภาพของ EO และเพอร์เมทรินพบว่าเพอร์เมทรินมีฤทธิ์ในการก่อภูมิแพ้ที่รุนแรงกว่า โดยมีค่า LD50 เท่ากับ 0.44 และ 3.70 นาโนกรัม/มิลลิกรัมในยุงลายสายพันธุ์ MCM-S และ PMD-R ตามลำดับ ผลการวิจัยเหล่านี้ได้รับการสนับสนุนจากงานวิจัยหลายชิ้นที่แสดงให้เห็นว่าสารกำจัดศัตรูพืชที่เกิดขึ้นตามธรรมชาติ โดยเฉพาะผลิตภัณฑ์ที่ได้จากพืช โดยทั่วไปมีประสิทธิภาพน้อยกว่าสารสังเคราะห์ [31, 34, 35, 53, 54] ซึ่งอาจเป็นเพราะสาร EO เป็นสารประกอบเชิงซ้อนของสารออกฤทธิ์และสารที่ไม่ออกฤทธิ์ ในขณะที่สาร EO เป็นสารประกอบออกฤทธิ์เดี่ยวที่ผ่านการทำให้บริสุทธิ์แล้ว อย่างไรก็ตาม ความหลากหลายและความซับซ้อนของสารออกฤทธิ์จากธรรมชาติที่มีกลไกการออกฤทธิ์ที่แตกต่างกันอาจช่วยเพิ่มฤทธิ์ทางชีวภาพหรือขัดขวางการพัฒนาความต้านทานในประชากรโฮสต์ [55, 56, 57] นักวิจัยหลายท่านได้รายงานถึงศักยภาพในการป้องกันยุงของ C. verum, A. galanga และ C. rotundus และส่วนประกอบต่างๆ เช่น β-bisabolene, cinnamaldehyde และ 1,8-cineole [22, 36, 58, 59, 60,61, 62,63, 64] อย่างไรก็ตาม การทบทวนวรรณกรรมพบว่ายังไม่มีรายงานก่อนหน้านี้เกี่ยวกับผลเสริมฤทธิ์ของสารนี้ร่วมกับเพอร์เมทรินหรือยาฆ่าแมลงสังเคราะห์อื่นๆ ต่อยุงลายบ้าน (Aedes aegypti)
ในการศึกษานี้ พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในความไวต่อเพอร์เมทรินระหว่างยุงลายสองสายพันธุ์ ยุงลาย Aedes aegypti สายพันธุ์ MCM-S มีความไวต่อเพอร์เมทริน ในขณะที่ PMD-R มีความไวต่อเพอร์เมทรินน้อยกว่ามาก โดยมีอัตราการดื้อยาที่ 8.41 เมื่อเทียบกับความไวของ MCM-S แล้ว PMD-R มีความไวต่อเพอร์เมทรินน้อยกว่าแต่มีความไวต่อ EO มากกว่า ซึ่งเป็นพื้นฐานสำหรับการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพของเพอร์เมทรินโดยการผสมเพอร์เมทรินกับ EO การทดลองทางชีวภาพแบบผสมผสานที่เสริมฤทธิ์กันสำหรับผลของยุงลายตัวเต็มวัยพบว่าสารผสม EO และเพอร์เมทรินสามารถลดหรือเพิ่มอัตราการตายของยุงลายตัวเต็มวัยได้ การเติมน้ำมัน C. verum ทำให้ค่า LD50 ของเพอร์เมทรินต่อ MCM-S ลดลงเล็กน้อย แต่ค่า LD50 ต่อ PMD-R เพิ่มขึ้นเล็กน้อย โดยมีค่า SR เท่ากับ 1.05 และ 0.96 ตามลำดับ ข้อมูลนี้บ่งชี้ว่าน้ำมัน C. verum ไม่มีผลเสริมฤทธิ์หรือต่อต้านเพอร์เมทรินเมื่อทดสอบกับ MCM-S และ PMD-R ในทางตรงกันข้าม น้ำมัน C. rotundus และ A. galanga แสดงผลเสริมฤทธิ์อย่างมีนัยสำคัญโดยการลดค่า LD50 ของเพอร์เมทรินบน MCM-S หรือ PMD-R อย่างมีนัยสำคัญ เมื่อนำเพอร์เมทรินมาผสมกับ EO ของ C. rotundus และ A. galanga ค่า SR ของส่วนผสม EO-permethrin สำหรับ MCM-S เท่ากับ 6.28 และ 4.00 ตามลำดับ นอกจากนี้ เมื่อประเมินเพอร์เมทรินเทียบกับ PMD-R ร่วมกับ C. rotundus (SR = 8.81) หรือ A. galanga (SR = 1233.33) ค่า SR เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เป็นที่น่าสังเกตว่าทั้ง C. rotundus และ A. galanga เพิ่มความเป็นพิษของเพอร์เมทรินต่อ PMD-R Ae. aegypti อย่างมีนัยสำคัญ ในทำนองเดียวกัน พบว่า PBO เพิ่มความเป็นพิษของเพอร์เมทริน โดยมีค่า SR เท่ากับ 1.69 และ 5.69 สำหรับสายพันธุ์ MCM-S และ PMD-R ตามลำดับ เนื่องจาก C. rotundus และ A. galanga มีค่า SR สูงที่สุด จึงถือเป็นสารเสริมฤทธิ์ที่ดีที่สุดในการเพิ่มความเป็นพิษของเพอร์เมทรินบนสายพันธุ์ MCM-S และ PMD-R ตามลำดับ
งานวิจัยก่อนหน้านี้หลายชิ้นได้รายงานถึงฤทธิ์เสริมฤทธิ์ของการใช้สารกำจัดแมลงสังเคราะห์ร่วมกับสารสกัดจากพืชต่อยุงหลากหลายสายพันธุ์ การทดสอบทางชีวภาพเพื่อกำจัดลูกน้ำยุงก้นปล่อง Anopheles Stephensi ที่ศึกษาโดย Kalayanasundaram และ Das [65] พบว่าเฟนไทออน ซึ่งเป็นออร์แกโนฟอสเฟตสเปกตรัมกว้าง เกี่ยวข้องกับ Cleodendron inerme, Pedalium murax และ Parthenium hysterophorus พบว่าฤทธิ์เสริมฤทธิ์ระหว่างสารสกัดอย่างมีนัยสำคัญ โดยมีค่า SF เท่ากับ 1.31, 1.38, 1.40, 1.48, 1.61 และ 2.23 ตามลำดับ ในการคัดกรองเพื่อกำจัดลูกน้ำของป่าชายเลน 15 ชนิด พบว่าสารสกัดปิโตรเลียมอีเทอร์จากรากไม้ค้ำยันของป่าชายเลนมีประสิทธิภาพสูงสุดต่อยุง Culex quinquefasciatus โดยมีค่า LC50 เท่ากับ 25.7 มิลลิกรัมต่อลิตร [66] มีรายงานว่าฤทธิ์เสริมฤทธิ์ของสารสกัดนี้และสารกำจัดแมลงไพรีทรัมจากพืชสามารถลดค่า LC50 ของไพรีทรัมต่อตัวอ่อนของ C. quinquefasciatus จาก 0.132 มก./ล. เหลือ 0.107 มก./ล. นอกจากนี้ การศึกษานี้ยังใช้การคำนวณค่า SF ที่ 1.23 34, 35, 44] ได้มีการประเมินประสิทธิภาพร่วมกันของสารสกัดจากรากมะเขือม่วงและสารกำจัดแมลงสังเคราะห์หลายชนิด (เช่น เฟนไทออน ไซเพอร์เมทริน (สารไพรีทรอยด์สังเคราะห์) และไทม์ฟอส (สารกำจัดลูกน้ำออร์แกโนฟอสฟอรัส) ต่อยุงก้นปล่อง Stephensi [54] และ C. quinquefasciatus [34] การใช้ไซเพอร์เมทรินร่วมกับสารสกัดปิโตรเลียมอีเทอร์จากผลเหลืองแสดงให้เห็นถึงฤทธิ์เสริมฤทธิ์ต่อไซเพอร์เมทรินในทุกอัตราส่วน อัตราส่วนที่มีประสิทธิภาพสูงสุดคือสูตรผสมแบบไบนารี 1:1 โดยมีค่า LC50 และ SF เท่ากับ 0.0054 ppm และ 6.83 ตามลำดับ เมื่อเทียบกับ An. Stephen West[54] แม้ว่าสูตรผสมแบบไบนารี 1:1 ของ S. xanthocarpum และ temephos จะมีฤทธิ์ต้าน (SF = 0.6406) แต่สูตรผสม S. xanthocarpum-fenthion (1:1) แสดงฤทธิ์เสริมฤทธิ์กับ C. quinquefasciatus โดยมีค่า SF เท่ากับ 1.3125 [ 34]] Tong และ Blomquist [35] ศึกษาผลของเอทิลีนออกไซด์จากพืชต่อความเป็นพิษของคาร์บาริล (คาร์บาเมตสเปกตรัมกว้าง) และเพอร์เมทรินต่อยุงลาย Aedes aegypti. ผลการทดลองพบว่าเอทิลีนออกไซด์จากวุ้น พริกไทยดำ จูนิเปอร์ เฮลิคริซัม ไม้จันทน์ และงา เพิ่มความเป็นพิษของคาร์บาริลต่อยุงลาย ค่า SR ของตัวอ่อนยุงลายมีค่าตั้งแต่ 1.0 ถึง 7.0 ในทางตรงกันข้าม EOs ไม่มีความเป็นพิษต่อยุงลายตัวเต็มวัย ในระยะนี้ ยังไม่มีรายงานผลเสริมฤทธิ์กันของการใช้ Aedes aegypti และ EO-carbaryl ร่วมกัน PBO ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกเพื่อเพิ่มความเป็นพิษของคาร์บาริลต่อยุงลาย ค่า SR ของตัวอ่อนและตัวเต็มวัยของยุงลาย Aedes aegypti อยู่ที่ 4.9-9.5 และ 2.3 ตามลำดับ มีเพียงส่วนผสมสองชนิดของเพอร์เมทรินและ EO หรือ PBO เท่านั้นที่ได้รับการทดสอบฤทธิ์ฆ่าลูกน้ำ ส่วนผสม EO-เพอร์เมทรินมีฤทธิ์ต้าน ในขณะที่ส่วนผสม PBO-เพอร์เมทรินมีฤทธิ์เสริมฤทธิ์กันต่อยุงลาย Aedes ตัวอ่อนของยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) อย่างไรก็ตาม ยังไม่มีการทดลองการตอบสนองของปริมาณยาและการประเมิน SR สำหรับสารผสม PBO-permethrin แม้ว่าจะมีผลการศึกษาเกี่ยวกับฤทธิ์เสริมฤทธิ์ของสารผสมสังเคราะห์จากพืชต่อยุงพาหะอยู่บ้าง แต่ข้อมูลเหล่านี้สนับสนุนผลการศึกษาที่มีอยู่ ซึ่งเปิดโอกาสให้มีการเพิ่มสารเสริมฤทธิ์ไม่เพียงแต่เพื่อลดปริมาณยาที่ใช้ แต่ยังเพิ่มประสิทธิภาพในการฆ่าอีกด้วย ประสิทธิภาพของแมลง นอกจากนี้ ผลการศึกษานี้ยังแสดงให้เห็นเป็นครั้งแรกว่าน้ำมัน C. rotundus และน้ำมัน A. galanga มีประสิทธิภาพในการเสริมฤทธิ์กันสูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญต่อยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) สายพันธุ์ที่ไวต่อไพรีทรอยด์และดื้อต่อไพรีทรอยด์ เมื่อเทียบกับ PBO เมื่อใช้ร่วมกับความเป็นพิษของสารเพอร์เมทริน ยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) อย่างไรก็ตาม ผลการวิเคราะห์ฤทธิ์ที่ไม่คาดคิดแสดงให้เห็นว่าน้ำมัน C. verum มีฤทธิ์ต้านยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) ทั้งสองสายพันธุ์ได้ดีที่สุด น่าแปลกที่พิษของเพอร์เมทรินต่อยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) นั้นไม่น่าพอใจ ผลกระทบจากพิษและผลเสริมฤทธิ์ที่แตกต่างกันอาจเป็นผลมาจากการสัมผัสกับสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพชนิดและระดับที่แตกต่างกันในน้ำมันเหล่านี้
แม้จะมีความพยายามที่จะทำความเข้าใจวิธีการปรับปรุงประสิทธิภาพ แต่กลไกการทำงานร่วมกันยังคงไม่ชัดเจน เหตุผลที่เป็นไปได้สำหรับประสิทธิภาพและศักยภาพการทำงานร่วมกันที่แตกต่างกันอาจรวมถึงความแตกต่างในองค์ประกอบทางเคมีของผลิตภัณฑ์ที่ทดสอบ และความแตกต่างในความไวต่อยุงที่เกี่ยวข้องกับสถานะและการพัฒนาของการดื้อยา มีความแตกต่างระหว่างองค์ประกอบหลักและองค์ประกอบรองของเอทิลีนออกไซด์ที่ทดสอบในการศึกษานี้ และสารประกอบเหล่านี้บางชนิดแสดงให้เห็นว่ามีฤทธิ์ขับไล่และเป็นพิษต่อแมลงศัตรูพืชและพาหะนำโรคหลายชนิด [61,62,64,67,68] อย่างไรก็ตาม สารประกอบหลักที่พบในน้ำมัน C. rotundus, A. galanga และ C. verum เช่น cypern, β-bisabolene และ cinnamaldehyde ไม่ได้ถูกทดสอบในงานวิจัยนี้สำหรับฤทธิ์ต้านยุงตัวเต็มวัยและฤทธิ์เสริมฤทธิ์ต่อ Ae ตามลำดับ ยุงลายบ้าน ดังนั้น จึงจำเป็นต้องมีการศึกษาในอนาคตเพื่อแยกสารออกฤทธิ์ที่มีอยู่ในน้ำมันหอมระเหยแต่ละชนิด และอธิบายประสิทธิภาพในการฆ่าแมลงและปฏิกิริยาเสริมฤทธิ์กันของสารเหล่านั้นต่อยุงพาหะนำโรคนี้ โดยทั่วไป ฤทธิ์ในการฆ่าแมลงขึ้นอยู่กับการกระทำและปฏิกิริยาระหว่างสารพิษกับเนื้อเยื่อแมลง ซึ่งสามารถอธิบายให้เข้าใจง่ายขึ้นและแบ่งออกเป็นสามขั้นตอน ได้แก่ การแทรกซึมเข้าสู่ผิวหนังของแมลงและเยื่อหุ้มอวัยวะเป้าหมาย การกระตุ้น (= ปฏิกิริยากับเป้าหมาย) และการล้างพิษ [57, 69] ดังนั้น การเสริมฤทธิ์กันของสารฆ่าแมลงที่ส่งผลให้ประสิทธิภาพของสารพิษผสมกันมีประสิทธิภาพมากขึ้น จำเป็นต้องอาศัยอย่างน้อยหนึ่งในหมวดหมู่เหล่านี้ เช่น การแทรกซึมที่เพิ่มขึ้น การกระตุ้นสารประกอบที่สะสมมากขึ้น หรือการล้างพิษสารออกฤทธิ์ของสารฆ่าแมลงที่ลดลง ตัวอย่างเช่น การทนต่อพลังงานทำให้การแทรกซึมของคิวติเคิลผ่านคิวติเคิลที่หนาขึ้นและความต้านทานทางชีวเคมีช้าลง เช่น การเผาผลาญของยาฆ่าแมลงที่เพิ่มขึ้นซึ่งพบในแมลงบางสายพันธุ์ที่ดื้อยา [70, 71] ประสิทธิภาพที่สำคัญของ EOs ในการเพิ่มความเป็นพิษของเพอร์เมทริน โดยเฉพาะอย่างยิ่งต่อ PMD-R อาจบ่งชี้ถึงวิธีแก้ปัญหาการดื้อยาฆ่าแมลงโดยการทำปฏิกิริยากับกลไกการดื้อยา [57, 69, 70, 71] Tong และ Blomquist [35] สนับสนุนผลการศึกษานี้โดยแสดงให้เห็นถึงปฏิกิริยาเสริมฤทธิ์ระหว่าง EOs และยาฆ่าแมลงสังเคราะห์ ในการศึกษานี้ มีหลักฐานของฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์กำจัดพิษ รวมถึงไซโตโครม พี450 โมโนออกซิเจเนส และคาร์บอกซิลเอสเทอเรส ซึ่งมีความเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับการพัฒนาความต้านทานต่อยาฆ่าแมลงแบบดั้งเดิม PBO ไม่เพียงแต่ถูกกล่าวว่าเป็นสารยับยั้งการเผาผลาญของไซโตโครม พี450 โมโนออกซิเจเนส แต่ยังช่วยเพิ่มการแทรกซึมของยาฆ่าแมลง ดังที่แสดงให้เห็นจากการใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกในการศึกษาแบบเสริมฤทธิ์ [35, 72] ที่น่าสนใจคือ 1,8-cineole ซึ่งเป็นหนึ่งในองค์ประกอบสำคัญที่พบในน้ำมันข่า เป็นที่ทราบกันดีว่ามีฤทธิ์เป็นพิษต่อแมลง [22, 63, 73] และมีรายงานว่ามีฤทธิ์เสริมฤทธิ์กันในหลายสาขาของการวิจัยฤทธิ์ทางชีวภาพ [74] . ,75,76,77] นอกจากนี้ 1,8-cineole เมื่อใช้ร่วมกับยาหลายชนิด ได้แก่ curcumin [78], 5-fluorouracil [79], mefenamic acid [80] และ zidovudine [81] ก็มีฤทธิ์ส่งเสริมการซึมผ่านเช่นกัน ในหลอดทดลอง ดังนั้น บทบาทที่เป็นไปได้ของ 1,8-cineole ในฤทธิ์เสริมฤทธิ์กันของยาฆ่าแมลงจึงไม่เพียงแต่เป็นสารออกฤทธิ์เท่านั้น แต่ยังเป็นสารเพิ่มการซึมผ่านอีกด้วย เนื่องจากเพอร์เมทรินมีฤทธิ์เสริมฤทธิ์กันมากขึ้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการต่อต้าน PMD-R ฤทธิ์เสริมฤทธิ์กันของน้ำมันข่าและน้ำมันไตรโคแซนทีสที่พบในการศึกษานี้อาจเป็นผลมาจากปฏิกิริยากับกลไกการต้านทาน เช่น การเพิ่มการซึมผ่านของคลอรีน ไพรีทรอยด์ช่วยเพิ่มการทำงานของสารประกอบที่สะสมและยับยั้งเอนไซม์กำจัดพิษ เช่น ไซโตโครม พี450 โมโนออกซิเจเนส และคาร์บอกซิลเอสเทอเรส อย่างไรก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเกี่ยวกับประเด็นเหล่านี้เพื่ออธิบายบทบาทเฉพาะของ EO และสารประกอบที่แยกออกมา (แบบเดี่ยวหรือแบบผสม) ในกลไกการเสริมฤทธิ์กัน
ในปี พ.ศ. 2520 มีรายงานระดับความต้านทานต่อเพอร์เมทรินที่เพิ่มขึ้นในประชากรพาหะนำโรคหลักในประเทศไทย และในช่วงหลายทศวรรษต่อมา การใช้เพอร์เมทรินส่วนใหญ่ถูกแทนที่ด้วยสารเคมีไพรีทรอยด์ชนิดอื่น โดยเฉพาะอย่างยิ่งสารเคมีที่ถูกแทนที่ด้วยเดลตาเมทริน [82] อย่างไรก็ตาม การดื้อต่อเดลตาเมทรินและยาฆ่าแมลงประเภทอื่นๆ ของพาหะนำโรคพบได้บ่อยมากทั่วประเทศเนื่องจากการใช้ในปริมาณมากและต่อเนื่อง [14, 17, 83, 84, 85, 86] เพื่อแก้ไขปัญหานี้ ขอแนะนำให้หมุนเวียนหรือนำยาฆ่าแมลงที่ถูกทิ้งแล้วซึ่งก่อนหน้านี้มีประสิทธิภาพและเป็นพิษน้อยกว่าต่อสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมมาใช้ซ้ำ เช่น เพอร์เมทริน ปัจจุบัน แม้ว่าการใช้เพอร์เมทรินจะลดลงในโครงการควบคุมยุงของรัฐบาลแห่งชาติเมื่อเร็วๆ นี้ แต่ยังคงพบความต้านทานต่อเพอร์เมทรินในประชากรยุง ซึ่งอาจเกิดจากการที่ยุงสัมผัสกับผลิตภัณฑ์ควบคุมศัตรูพืชเชิงพาณิชย์ในครัวเรือน ซึ่งส่วนใหญ่ประกอบด้วยเพอร์เมทรินและไพรีทรอยด์อื่นๆ [14, 17] ดังนั้น การนำเพอร์เมทรินกลับมาใช้ใหม่ให้ประสบความสำเร็จจึงจำเป็นต้องอาศัยการพัฒนาและดำเนินกลยุทธ์เพื่อลดการดื้อยาของแมลง แม้ว่าน้ำมันหอมระเหยที่ทดสอบแยกกันในการศึกษานี้จะไม่มีประสิทธิภาพเทียบเท่าเพอร์เมทริน แต่การใช้ร่วมกับเพอร์เมทรินก็ให้ผลลัพธ์ที่เสริมฤทธิ์กันอย่างน่าประทับใจ นี่เป็นข้อบ่งชี้ที่น่ายินดีว่าปฏิกิริยาระหว่าง EO กับกลไกการดื้อยาส่งผลให้การใช้เพอร์เมทรินร่วมกับ EO มีประสิทธิภาพมากกว่าการใช้ยาฆ่าแมลงหรือ EO เพียงอย่างเดียว โดยเฉพาะอย่างยิ่งต่อ PMD-R Ae. Aedes aegypti ประโยชน์ของสารผสมที่เสริมฤทธิ์กันในการเพิ่มประสิทธิภาพ แม้จะใช้ยาในปริมาณที่ต่ำกว่าเพื่อควบคุมแมลงพาหะ ก็อาจนำไปสู่การจัดการการดื้อยาที่ดีขึ้นและลดต้นทุน [33, 87] จากผลการศึกษาเหล่านี้ เป็นที่น่ายินดีที่ EO จาก A. galanga และ C. rotundus มีประสิทธิภาพมากกว่า PBO อย่างมีนัยสำคัญในการเสริมฤทธิ์ความเป็นพิษของเพอร์เมทรินในทั้งสายพันธุ์ MCM-S และ PMD-R และเป็นทางเลือกที่มีศักยภาพสำหรับสารช่วยเสริมสมรรถภาพทางกายแบบดั้งเดิม
สารกำจัดศัตรูพืชชนิดอีโอที่คัดเลือกมามีผลเสริมฤทธิ์กันอย่างมีนัยสำคัญในการเพิ่มความเป็นพิษต่อยุงในผู้ใหญ่ต่อสารกำจัดศัตรูพืชชนิด PMD-R สารกำจัดศัตรูพืชชนิดอีโอ (E. aegypti) โดยเฉพาะน้ำมันข่า มีค่า SR สูงถึง 1233.33 ซึ่งบ่งชี้ว่าสารกำจัดศัตรูพืชชนิดอีโอมีแนวโน้มที่ดีในฐานะสารเสริมฤทธิ์ในการเพิ่มประสิทธิภาพของเพอร์เมทริน ซึ่งอาจกระตุ้นให้เกิดการใช้ผลิตภัณฑ์ธรรมชาติออกฤทธิ์ชนิดใหม่ ซึ่งเมื่อรวมกันแล้วอาจช่วยเพิ่มการใช้ผลิตภัณฑ์ควบคุมยุงที่มีประสิทธิภาพสูง นอกจากนี้ยังเผยให้เห็นศักยภาพของเอทิลีนออกไซด์ในฐานะสารเสริมฤทธิ์ทางเลือกในการพัฒนายาฆ่าแมลงแบบเดิมหรือแบบดั้งเดิมอย่างมีประสิทธิภาพ เพื่อแก้ไขปัญหาการดื้อยาของประชากรยุง การใช้พืชที่หาได้ง่ายในโครงการควบคุมยุงไม่เพียงแต่ช่วยลดการพึ่งพาวัตถุดิบนำเข้าและมีราคาแพงเท่านั้น แต่ยังช่วยกระตุ้นความพยายามในท้องถิ่นในการเสริมสร้างระบบสาธารณสุขอีกด้วย
ผลการศึกษาเหล่านี้แสดงให้เห็นอย่างชัดเจนถึงฤทธิ์เสริมฤทธิ์ที่สำคัญที่เกิดจากการใช้เอทิลีนออกไซด์ร่วมกับเพอร์เมทริน ผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นถึงศักยภาพของเอทิลีนออกไซด์ในฐานะสารเสริมฤทธิ์ของพืชในการควบคุมยุง ซึ่งช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของเพอร์เมทรินในการควบคุมยุง โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกลุ่มประชากรที่ดื้อยา การพัฒนาและการวิจัยในอนาคตจำเป็นต้องมีการวิเคราะห์ทางชีวภาพแบบเสริมฤทธิ์ของน้ำมันข่าและอัลพิเนีย รวมถึงสารประกอบที่แยกได้ การใช้ยาฆ่าแมลงทั้งจากธรรมชาติหรือสารสังเคราะห์ร่วมกับยาฆ่าแมลงหลายชนิดและหลายระยะของยุง และการทดสอบความเป็นพิษต่อสิ่งมีชีวิตที่ไม่ใช่เป้าหมาย การใช้เอทิลีนออกไซด์เป็นทางเลือกเสริมฤทธิ์ที่เป็นไปได้ในทางปฏิบัติ
องค์การอนามัยโลก ยุทธศาสตร์ระดับโลกเพื่อการป้องกันและควบคุมโรคไข้เลือดออก พ.ศ. 2555–2563 เจนีวา: องค์การอนามัยโลก, 2555
ผู้ประกอบ SC, Costa F. , Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G. , และคณะ ไวรัสซิกา: ประวัติศาสตร์ การเกิดขึ้น ชีววิทยา และโอกาสในการควบคุม การวิจัยต้านไวรัส 2016;130:69–80.
องค์การอนามัยโลก เอกสารข้อเท็จจริงเกี่ยวกับโรคไข้เลือดออก 2559 http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/ เข้าถึงเมื่อ: 20 มกราคม 2560
กรมสาธารณสุข สถานการณ์ปัจจุบันของโรคไข้เลือดออกและไข้เลือดออกในประเทศไทย พ.ศ. 2559 http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf เข้าถึงเมื่อ: 6 มกราคม 2560
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 ปีของการป้องกันและควบคุมโรคไข้เลือดออกในสิงคโปร์ โรคติดเชื้อเฉียบพลัน. 2006;12:887–93
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. ระบุความท้าทายและเสนอแนวทางแก้ไขเพื่อควบคุมพาหะไวรัส Aedes aegypti PLOS Medicine. 2008;5:362–6
ศูนย์ควบคุมและป้องกันโรค ไข้เลือดออก กีฏวิทยา และนิเวศวิทยา 2559. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/ เข้าถึงเมื่อ: 6 มกราคม 2560
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE การเปรียบเทียบฤทธิ์ฆ่าลูกน้ำของใบ เปลือก ลำต้น และรากของ Jatropa curcas (Euphorbiaceae) กับ Anopheles gambiae ซึ่งเป็นพาหะนำโรคมาลาเรีย SZhBR. 2014;3:29-32
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. ลักษณะถิ่นที่อยู่ของตัวอ่อนยุงก้นปล่องในพื้นที่โครงการกำจัดมาลาเรียในภาคตะวันออกเฉียงใต้ของอิหร่าน. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Suppl 1):S73–80
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. การทบทวนแนวทางการควบคุมพาหะ การป้องกัน และการควบคุมการระบาดของไวรัสเวสต์ไนล์ และความท้าทายที่ยุโรปกำลังเผชิญ ปรสิตพาหะ. 2014;7:323
Muthusamy R., Shivakumar MS การคัดเลือกและกลไกระดับโมเลกุลของความต้านทานต่อไซเปอร์เมทรินในหนอนผีเสื้อสีแดง (Amsacta albistriga Walker) สรีรวิทยาทางชีวเคมีของศัตรูพืช 2014;117:54–61
Ramkumar G., Shivakumar MS การศึกษาในห้องปฏิบัติการเกี่ยวกับความต้านทานต่อเพอร์เมทรินและการต้านทานข้ามสายพันธุ์ของ Culex quinquefasciatus กับยาฆ่าแมลงชนิดอื่น Palastor Research Center. 2015;114:2553–60
มัตสึนากะ เอส. ฮัทสัน ดีเอช. เมอร์ฟี เอส. เคมียาฆ่าแมลง: สวัสดิภาพมนุษย์และสิ่งแวดล้อม เล่ม 3: กลไกการออกฤทธิ์ เมแทบอลิซึม และพิษวิทยา นิวยอร์ก: สำนักพิมพ์เพอร์กามอน, 1983
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. การทบทวนวรรณกรรมเรื่องความต้านทานต่อยาฆ่าแมลงและการหลีกเลี่ยงพฤติกรรมของพาหะนำโรคในมนุษย์ในประเทศไทย. ปรสิตพาหะ. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. รูปแบบปัจจุบันของความต้านทานต่อยาฆ่าแมลงในยุงพาหะในประเทศไทย Southeast Asia J Trop Med Public Health. 1999;30:184-94
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. สถานภาพโรคมาลาเรียในประเทศไทย. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 2000;31:225–37.
เพลินทรัพย์ ส., ไสยงามสุข จ., ยาโนลา จ., ลำจวน นา., ทิพวรรณโกศล พ., วอลตัน ส., สมบุญ พ. ความถี่ชั่วคราวของการกลายพันธุ์ที่ต้านทานการน็อคดาวน์ F1534C และ V1016G ในยุงลายบ้าน (Aedes aegypti) ในจังหวัดเชียงใหม่ ประเทศไทย และผลกระทบของการกลายพันธุ์ต่อประสิทธิภาพของสเปรย์หมอกความร้อนที่มีสารไพรีทรอยด์ Aktatrop. 2016;162:125–32
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. การดื้อยาฆ่าแมลงในพาหะไข้เลือดออกหลัก Aedes albopictus และ Aedes aegypti สรีรวิทยาทางชีวเคมีของศัตรูพืช 2012;104:126–31.