อัตราการตายและความเป็นพิษของสารไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ต่อลูกอ๊อดน้ำขนาดเล็ก

การศึกษาครั้งนี้ประเมินระดับความเป็นอันตราย ระดับความไม่เป็นอันตราย และความเป็นพิษของสารเชิงพาณิชย์ไซเปอร์เมทรินสูตรสำหรับลูกอ๊อดในตัวอ่อน ในการทดสอบแบบเฉียบพลัน ทดสอบความเข้มข้น 100–800 μg/L เป็นเวลา 96 ชั่วโมง ในการทดสอบแบบเรื้อรัง ทดสอบความเข้มข้นของไซเปอร์เมทรินที่เกิดขึ้นตามธรรมชาติ (1, 3, 6 และ 20 μg/L) เพื่อดูอัตราการตาย ตามด้วยการทดสอบไมโครนิวเคลียสและความผิดปกติของนิวเคลียสเม็ดเลือดแดงเป็นเวลา 7 วัน LC50 ของสูตรไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์สำหรับลูกอ๊อดคือ 273.41 μg L−1 ในการทดสอบแบบเรื้อรัง ความเข้มข้นสูงสุด (20 μg L−1) ส่งผลให้อัตราการตายมากกว่า 50% เนื่องจากฆ่าลูกอ๊อดที่ทดสอบไปครึ่งหนึ่ง การทดสอบไมโครนิวเคลียสแสดงผลลัพธ์ที่สำคัญที่ 6 และ 20 μg L−1 และพบความผิดปกติทางนิวเคลียสหลายประการ ซึ่งบ่งชี้ว่าสูตรไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์มีศักยภาพในการก่อพิษต่อพันธุกรรมต่อ P. gracilis ไซเปอร์เมทรินเป็นสารที่มีความเสี่ยงสูงสำหรับสปีชีส์นี้ ซึ่งบ่งชี้ว่าไซเปอร์เมทรินสามารถก่อให้เกิดปัญหาต่างๆ มากมาย และส่งผลกระทบต่อพลวัตของระบบนิเวศนี้ในระยะสั้นและระยะยาว ดังนั้น จึงสรุปได้ว่าไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์มีผลเป็นพิษต่อ P. gracilis
เนื่องจากกิจกรรมทางการเกษตรขยายตัวอย่างต่อเนื่องและมีการประยุกต์ใช้อย่างเข้มข้นการกำจัดศัตรูพืชมาตรการดังกล่าวทำให้สัตว์น้ำมักสัมผัสกับยาฆ่าแมลง1,2 มลพิษของแหล่งน้ำใกล้พื้นที่เกษตรกรรมอาจส่งผลต่อการเจริญเติบโตและการอยู่รอดของสิ่งมีชีวิตที่ไม่ใช่เป้าหมาย เช่น สัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก
สัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกกำลังกลายเป็นสิ่งที่มีความสำคัญมากขึ้นเรื่อยๆ ในการประเมินเมทริกซ์สิ่งแวดล้อม กบถือเป็นตัวบ่งชี้ชีวภาพที่ดีของมลพิษทางสิ่งแวดล้อมเนื่องจากลักษณะเฉพาะของมัน เช่น วงจรชีวิตที่ซับซ้อน อัตราการเจริญเติบโตของตัวอ่อนที่รวดเร็ว สถานะโภชนาการ ผิวหนังที่ซึมผ่านได้10,11 การพึ่งพาน้ำเพื่อการสืบพันธุ์12 และไข่ที่ไม่ได้รับการปกป้อง11,13,14 กบน้ำเล็ก (Physalaemus gracilis) ซึ่งรู้จักกันทั่วไปในชื่อกบร้องไห้ ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าเป็นสายพันธุ์ของตัวบ่งชี้ชีวภาพของมลพิษจากยาฆ่าแมลง4,5,6,7,15 สายพันธุ์นี้พบได้ในแหล่งน้ำนิ่ง พื้นที่คุ้มครอง หรือพื้นที่ที่มีถิ่นที่อยู่อาศัยแปรผันในอาร์เจนตินา อุรุกวัย ปารากวัย และบราซิล1617 และได้รับการพิจารณาว่าเสถียรตามการจำแนกของ IUCN เนื่องจากมีการกระจายพันธุ์ที่กว้างและทนต่อถิ่นที่อยู่อาศัยที่แตกต่างกัน18
มีรายงานผลกระทบไม่ถึงแก่ชีวิตในสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกหลังจากได้รับไซเปอร์เมทริน ได้แก่ การเปลี่ยนแปลงทางพฤติกรรม สัณฐานวิทยา และชีวเคมีในลูกอ๊อด23,24,25 อัตราการตายและเวลาการเปลี่ยนแปลงรูปร่างที่เปลี่ยนไป การเปลี่ยนแปลงทางเอนไซม์ ความสำเร็จในการฟักไข่ที่ลดลง24,25 สมาธิสั้น26 การยับยั้งกิจกรรมของโคลีนเอสเทอเรส27 และการเปลี่ยนแปลงในประสิทธิภาพการว่ายน้ำ7,28 อย่างไรก็ตาม การศึกษาผลกระทบของไซเปอร์เมทรินต่อพันธุกรรมในสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกยังมีจำกัด ดังนั้น การประเมินความอ่อนไหวของสปีชีส์กบต่อไซเปอร์เมทรินจึงมีความสำคัญ
มลพิษทางสิ่งแวดล้อมส่งผลต่อการเจริญเติบโตและพัฒนาการตามปกติของสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก แต่ผลกระทบร้ายแรงที่สุดคือความเสียหายทางพันธุกรรมต่อดีเอ็นเอที่เกิดจากการสัมผัสกับยาฆ่าแมลง13 การวิเคราะห์สัณฐานวิทยาของเซลล์เม็ดเลือดเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่สำคัญของมลพิษและความเป็นพิษที่อาจเกิดขึ้นของสารต่อสัตว์ป่า29 การทดสอบไมโครนิวเคลียสเป็นหนึ่งในวิธีการที่ใช้กันทั่วไปมากที่สุดในการกำหนดความเป็นพิษของสารเคมีในสิ่งแวดล้อม30 เป็นวิธีที่รวดเร็ว มีประสิทธิภาพ และราคาไม่แพง ซึ่งเป็นตัวบ่งชี้ที่ดีของมลพิษทางเคมีของสิ่งมีชีวิต เช่น สัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก31,32 และสามารถให้ข้อมูลเกี่ยวกับการสัมผัสกับสารมลพิษที่เป็นพิษต่อพันธุกรรม33
วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้คือเพื่อประเมินศักยภาพของพิษของสูตรไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ต่อลูกอ๊อดน้ำขนาดเล็กโดยใช้การทดสอบไมโครนิวเคลียสและการประเมินความเสี่ยงทางนิเวศวิทยา
อัตราการเสียชีวิตสะสม (%) ของลูกอ๊อด P. gracilis ที่สัมผัสกับไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ในความเข้มข้นต่างกันในช่วงเฉียบพลันของการทดสอบ
อัตราการเสียชีวิตสะสม (%) ของลูกอ๊อด P. gracilis ที่สัมผัสกับไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ในความเข้มข้นต่างกันระหว่างการทดสอบแบบเรื้อรัง
อัตราการเสียชีวิตที่สูงที่สังเกตพบนั้นเป็นผลมาจากผลของความเป็นพิษต่อพันธุกรรมในสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกที่สัมผัสกับไซเปอร์เมทรินในความเข้มข้นที่แตกต่างกัน (6 และ 20 ไมโครกรัมต่อลิตร) ซึ่งพิสูจน์ได้จากการมีอยู่ของไมโครนิวเคลียส (MN) และความผิดปกติของนิวเคลียสในเม็ดเลือดแดง การเกิด MN บ่งชี้ถึงข้อผิดพลาดในการแบ่งเซลล์แบบไมโทซิส และสัมพันธ์กับการจับกันที่ไม่ดีของโครโมโซมกับไมโครทูบูล ข้อบกพร่องในคอมเพล็กซ์โปรตีนที่มีหน้าที่ในการดูดซับและขนส่งโครโมโซม ข้อผิดพลาดในการแยกโครโมโซม และข้อผิดพลาดในการซ่อมแซมความเสียหายของดีเอ็นเอ38,39 และอาจเกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชันที่เกิดจากยาฆ่าแมลง40,41 พบความผิดปกติอื่นๆ ในทุกความเข้มข้นที่ประเมิน การเพิ่มความเข้มข้นของไซเปอร์เมทรินทำให้ความผิดปกติของนิวเคลียสในเม็ดเลือดแดงเพิ่มขึ้น 5% และ 20% ในปริมาณต่ำสุด (1 ไมโครกรัมต่อลิตร) และสูงสุด (20 ไมโครกรัมต่อลิตร) ตามลำดับ ตัวอย่างเช่น การเปลี่ยนแปลงใน DNA ของสปีชีส์สามารถส่งผลร้ายแรงต่อการอยู่รอดทั้งในระยะสั้นและระยะยาว ส่งผลให้ประชากรลดลง สมรรถภาพการสืบพันธุ์เปลี่ยนแปลง การผสมพันธุ์ในสายพันธุ์เดียวกัน การสูญเสียความหลากหลายทางพันธุกรรม และอัตราการอพยพที่เปลี่ยนแปลง ปัจจัยทั้งหมดเหล่านี้สามารถส่งผลกระทบต่อการอยู่รอดและการดำรงอยู่ของสปีชีส์42,43 การก่อตัวของความผิดปกติของเม็ดเลือดแดงอาจบ่งชี้ถึงการปิดกั้นในกระบวนการไซโตไคนีซิส ส่งผลให้เกิดการแบ่งเซลล์ที่ผิดปกติ (เม็ดเลือดแดงที่มีนิวเคลียสสองนิวเคลียส)44,45 นิวเคลียสที่มีหลายกลีบเป็นส่วนที่ยื่นออกมาจากเยื่อหุ้มนิวเคลียสที่มีหลายกลีบ46 ในขณะที่ความผิดปกติอื่นๆ ของเม็ดเลือดแดงอาจเกี่ยวข้องกับการขยาย DNA เช่น ไต/ตุ่มน้ำในนิวเคลียส47 การมีเม็ดเลือดแดงที่ไม่มีนิวเคลียสอาจบ่งชี้ถึงการขนส่งออกซิเจนที่บกพร่อง โดยเฉพาะในน้ำที่ปนเปื้อน48,49 อะพอพโทซิสบ่งชี้ถึงการตายของเซลล์50
การศึกษาวิจัยอื่นๆ ยังได้แสดงให้เห็นถึงผลของไซเปอร์เมทรินต่อพันธุกรรมอีกด้วย Kabaña และคณะ51 ได้แสดงให้เห็นถึงการมีอยู่ของไมโครนิวเคลียสและการเปลี่ยนแปลงของนิวเคลียส เช่น เซลล์ที่มีนิวเคลียสสองนิวเคลียสและเซลล์ที่เกิดอะพอพโทซิสในเซลล์ Odontophrynus americanus หลังจากสัมผัสกับไซเปอร์เมทรินความเข้มข้นสูง (5,000 และ 10,000 μg L−1) เป็นเวลา 96 ชั่วโมง นอกจากนี้ยังตรวจพบอะพอพโทซิสที่เกิดจากไซเปอร์เมทรินใน P. biligonigerus52 และ Rhinella arenarum53 ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าไซเปอร์เมทรินมีผลต่อพันธุกรรมต่อสิ่งมีชีวิตในน้ำหลายชนิด และการทดสอบ MN และ ENA อาจเป็นตัวบ่งชี้ผลกระทบที่ไม่เป็นอันตรายถึงชีวิตต่อสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก และอาจใช้ได้กับสัตว์พื้นเมืองและประชากรป่าที่สัมผัสกับสารพิษ12
สูตรทางการค้าของไซเปอร์เมทรินก่อให้เกิดอันตรายต่อสิ่งแวดล้อมสูง (ทั้งแบบเฉียบพลันและเรื้อรัง) โดยมีค่า HQ เกินระดับที่สำนักงานปกป้องสิ่งแวดล้อมแห่งสหรัฐอเมริกา (EPA) กำหนด54 ซึ่งอาจส่งผลเสียต่อสปีชีส์ดังกล่าวได้หากมีอยู่ในสิ่งแวดล้อม ในการประเมินความเสี่ยงเรื้อรัง ค่า NOEC สำหรับอัตราการตายอยู่ที่ 3 μg L−1 ซึ่งยืนยันว่าความเข้มข้นที่พบในน้ำอาจก่อให้เกิดความเสี่ยงต่อสปีชีส์ดังกล่าว55 ค่า NOEC ที่ทำให้ถึงแก่ชีวิตสำหรับตัวอ่อนของ R. arenarum ที่สัมผัสกับส่วนผสมของเอนโดซัลแฟนและไซเปอร์เมทรินอยู่ที่ 500 μg L−1 หลังจาก 168 ชั่วโมง ค่านี้ลดลงเหลือ 0.0005 μg L−1 หลังจาก 336 ชั่วโมง ผู้เขียนแสดงให้เห็นว่ายิ่งสัมผัสเป็นเวลานานเท่าใด ความเข้มข้นที่เป็นอันตรายต่อสปีชีส์ก็จะยิ่งลดลงเท่านั้น นอกจากนี้ ยังควรเน้นย้ำด้วยว่าค่า NOEC สูงกว่าค่าของ P. gracilis ในช่วงเวลาสัมผัสเดียวกัน ซึ่งบ่งชี้ว่าการตอบสนองของสปีชีส์ต่อไซเปอร์เมทรินนั้นจำเพาะต่อสปีชีส์ นอกจากนี้ ในแง่ของอัตราการตาย ค่า CHQ ของ P. gracilis หลังจากสัมผัสกับไซเปอร์เมทรินสูงถึง 64.67 ซึ่งสูงกว่าค่าอ้างอิงที่สำนักงานปกป้องสิ่งแวดล้อมแห่งสหรัฐอเมริกากำหนดไว้54 และค่า CHQ ของตัวอ่อนของ R. arenarum ก็สูงกว่าค่านี้เช่นกัน (CHQ > 388.00 หลังจาก 336 ชั่วโมง) แสดงให้เห็นว่ายาฆ่าแมลงที่ศึกษามีความเสี่ยงสูงต่อสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกหลายชนิด เมื่อพิจารณาว่า P. gracilis ต้องใช้เวลาประมาณ 30 วันในการเปลี่ยนแปลงรูปร่างจนสมบูรณ์56 จึงสรุปได้ว่าความเข้มข้นของไซเปอร์เมทรินที่ศึกษาอาจช่วยลดจำนวนประชากรได้ โดยป้องกันไม่ให้บุคคลที่ติดเชื้อเข้าสู่วัยผู้ใหญ่หรือระยะสืบพันธุ์ในช่วงอายุน้อย
ในการประเมินความเสี่ยงที่คำนวณได้ของไมโครนิวเคลียสและความผิดปกติอื่นๆ ของนิวเคลียสเม็ดเลือดแดง ค่า CHQ อยู่ในช่วง 14.92 ถึง 97.00 ซึ่งบ่งชี้ว่าไซเปอร์เมทรินมีความเสี่ยงต่อการเกิดพิษต่อพันธุกรรมต่อ P. gracilis แม้จะอยู่ในแหล่งที่อยู่อาศัยตามธรรมชาติ เมื่อคำนึงถึงอัตราการตาย ความเข้มข้นสูงสุดของสารซีนไบโอติกที่ P. gracilis ยอมรับได้คือ 4.24 μg L−1 อย่างไรก็ตาม ความเข้มข้นที่ต่ำถึง 1 μg/L ก็แสดงผลต่อการเกิดพิษต่อพันธุกรรมเช่นกัน ข้อเท็จจริงนี้อาจนำไปสู่การเพิ่มจำนวนของบุคคลที่ผิดปกติ57 และส่งผลต่อการพัฒนาและการสืบพันธุ์ของสปีชีส์ในแหล่งที่อยู่อาศัยของพวกมัน ส่งผลให้ประชากรสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกลดลง
สูตรยาฆ่าแมลงไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์แสดงพิษเฉียบพลันและเรื้อรังสูงต่อ P. gracilis พบอัตราการตายที่สูงขึ้น ซึ่งอาจเกิดจากผลพิษ ดังจะเห็นได้จากการมีไมโครนิวเคลียสและความผิดปกติของนิวเคลียสของเม็ดเลือดแดง โดยเฉพาะนิวเคลียสหยัก นิวเคลียสแฉก และนิวเคลียสเวสิคูลาร์ นอกจากนี้ สายพันธุ์ที่ศึกษายังแสดงความเสี่ยงต่อสิ่งแวดล้อมที่เพิ่มขึ้น ทั้งแบบเฉียบพลันและเรื้อรัง ข้อมูลเหล่านี้ เมื่อรวมกับการศึกษาก่อนหน้านี้ของกลุ่มวิจัยของเรา แสดงให้เห็นว่าแม้แต่สูตรยาไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ที่แตกต่างกันก็ยังทำให้กิจกรรมของอะเซทิลโคลีนเอสเทอเรส (AChE) และบิวทีริลโคลีนเอสเทอเรส (BChE) ลดลง และเกิดความเครียดออกซิเดชัน58 และส่งผลให้กิจกรรมการว่ายน้ำเปลี่ยนแปลงไป และความผิดปกติในช่องปาก59 ใน P. gracilis ซึ่งบ่งชี้ว่าสูตรยาไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์มีพิษร้ายแรงถึงชีวิตและไม่ถึงชีวิตต่อสายพันธุ์นี้ Hartmann et al. 60 พบว่าไซเปอร์เมทรินในเชิงพาณิชย์มีพิษมากที่สุดต่อ P. gracilis และอีกสายพันธุ์หนึ่งในสกุลเดียวกัน (P. cuvieri) เมื่อเปรียบเทียบกับยาฆ่าแมลงอีกเก้าชนิด ซึ่งแสดงให้เห็นว่าความเข้มข้นของไซเปอร์เมทรินที่ได้รับการอนุมัติตามกฎหมายสำหรับการปกป้องสิ่งแวดล้อมอาจส่งผลให้มีอัตราการตายสูงและจำนวนประชากรลดลงในระยะยาว
จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อประเมินความเป็นพิษของยาฆ่าแมลงต่อสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก เนื่องจากความเข้มข้นที่พบในสิ่งแวดล้อมอาจทำให้เกิดอัตราการตายสูงและเป็นความเสี่ยงที่อาจเกิดขึ้นกับ P. gracilis ควรส่งเสริมการวิจัยเกี่ยวกับสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก เนื่องจากข้อมูลเกี่ยวกับสิ่งมีชีวิตเหล่านี้มีน้อย โดยเฉพาะอย่างยิ่งในสัตว์ในบราซิล
การทดสอบพิษเรื้อรังใช้เวลา 168 ชั่วโมง (7 วัน) ภายใต้สภาวะคงที่ และความเข้มข้นที่ไม่เป็นอันตรายคือ 1, 3, 6 และ 20 μg ai L−1 ในการทดลองทั้งสองครั้ง ลูกอ๊อด 10 ตัวต่อกลุ่มการทดลองได้รับการประเมินโดยทำซ้ำ 6 ครั้ง รวมเป็นลูกอ๊อด 60 ตัวต่อความเข้มข้น ในขณะเดียวกัน การทดลองโดยใช้น้ำเพียงอย่างเดียวทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมเชิงลบ ชุดการทดลองแต่ละชุดประกอบด้วยจานแก้วที่ผ่านการฆ่าเชื้อซึ่งมีความจุ 500 มล. และความหนาแน่น 1 ลูกอ๊อดต่อสารละลาย 50 มล. ขวดถูกปกคลุมด้วยฟิล์มโพลีเอทิลีนเพื่อป้องกันการระเหยและมีการเติมอากาศอย่างต่อเนื่อง
น้ำได้รับการวิเคราะห์ทางเคมีเพื่อกำหนดความเข้มข้นของยาฆ่าแมลงที่ 0, 96 และ 168 ชั่วโมง ตามที่ Sabin et al. 68 และ Martins et al. 69 ระบุไว้ การวิเคราะห์ดำเนินการที่ห้องปฏิบัติการวิเคราะห์ยาฆ่าแมลง (LARP) ของมหาวิทยาลัยแห่งรัฐซานตามาเรียโดยใช้แก๊สโครมาโตกราฟีควบคู่กับแมสสเปกโตรมิเตอร์แบบควอดรูโพลสามตัว (Varian model 1200, Palo Alto, California, USA) การกำหนดปริมาณยาฆ่าแมลงในน้ำแสดงไว้เป็นข้อมูลเสริม (ตาราง SM1)
สำหรับการทดสอบไมโครนิวเคลียส (MNT) และการทดสอบความผิดปกติของนิวเคลียสเม็ดเลือดแดง (RNA) ลูกอ๊อด 15 ตัวจากแต่ละกลุ่มการรักษาได้รับการวิเคราะห์ ลูกอ๊อดได้รับการวางยาสลบด้วยลิโดเคน 5% (50 มก. กรัม-170) และเก็บตัวอย่างเลือดโดยการเจาะหัวใจโดยใช้เข็มฉีดยาเฮปารินแบบใช้แล้วทิ้ง เตรียมแผ่นเลือดบนสไลด์กล้องจุลทรรศน์ที่ผ่านการฆ่าเชื้อ ตากให้แห้ง ตรึงด้วยเมทานอล 100% (4 °C) เป็นเวลา 2 นาที จากนั้นย้อมด้วยสารละลาย Giemsa 10% เป็นเวลา 15 นาทีในที่มืด เมื่อสิ้นสุดกระบวนการ สไลด์จะถูกล้างด้วยน้ำกลั่นเพื่อขจัดคราบส่วนเกิน และตากให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง
เซลล์เม็ดเลือดแดงอย่างน้อย 1,000 ตัวจากลูกอ๊อดแต่ละตัวได้รับการวิเคราะห์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์กำลังขยาย 100 เท่าพร้อมเลนส์วัตถุ 71 เพื่อตรวจสอบการมีอยู่ของ MN และ ENA เซลล์เม็ดเลือดแดงทั้งหมด 75,796 ตัวจากลูกอ๊อดได้รับการประเมินโดยพิจารณาจากความเข้มข้นของไซเปอร์เมทรินและกลุ่มควบคุม พิษต่อพันธุกรรมได้รับการวิเคราะห์ตามวิธีของ Carrasco et al. และ Fenech et al.38,72 โดยกำหนดความถี่ของรอยโรคในนิวเคลียสต่อไปนี้: (1) เซลล์ที่ไม่มีนิวเคลียส: เซลล์ที่ไม่มีนิวเคลียส; (2) เซลล์ที่เกิดอะพอพโทซิส: การแตกตัวของนิวเคลียส การตายของเซลล์ตามโปรแกรม; (3) เซลล์ที่มีนิวเคลียสสองอัน: เซลล์ที่มีนิวเคลียสสองอัน; (4) เซลล์ที่มีตุ่มนิวเคลียสหรือเซลล์ที่มีตุ่ม: เซลล์ที่มีนิวเคลียสที่มีส่วนยื่นเล็กๆ ของเยื่อหุ้มนิวเคลียส ตุ่มที่มีขนาดใกล้เคียงกับไมโครนิวเคลียส; (5) เซลล์ที่ถูกแคริโอไลซิส: เซลล์ที่มีเพียงโครงร่างของนิวเคลียสที่ไม่มีวัสดุภายใน; (6) เซลล์ที่มีรอยหยัก: เซลล์ที่มีนิวเคลียสที่มีรอยแตกหรือรอยหยักที่ชัดเจนในรูปร่าง เรียกอีกอย่างว่านิวเคลียสที่มีรูปร่างเหมือนไต (7) เซลล์ที่มีกลีบ: เซลล์ที่มีส่วนที่ยื่นออกมาของนิวเคลียสใหญ่กว่าเวสิเคิลที่กล่าวถึงข้างต้น และ (8) ไมโครเซลล์: เซลล์ที่มีนิวเคลียสที่ควบแน่นและไซโทพลาซึมที่ลดลง นำการเปลี่ยนแปลงมาเปรียบเทียบกับผลการควบคุมเชิงลบ
ผลการทดสอบพิษเฉียบพลัน (LC50) ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ GBasic และวิธี TSK-Trimmed Spearman-Karber74 ข้อมูลการทดสอบเรื้อรังได้รับการทดสอบล่วงหน้าสำหรับค่าความปกติของข้อผิดพลาด (Shapiro-Wilks) และความสม่ำเสมอของความแปรปรวน (Bartlett) ผลลัพธ์ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) การทดสอบของ Tukey ใช้เพื่อเปรียบเทียบข้อมูลระหว่างกัน และใช้การทดสอบของ Dunnett เพื่อเปรียบเทียบข้อมูลระหว่างกลุ่มการรักษาและกลุ่มควบคุมเชิงลบ
ข้อมูล LOEC และ NOEC ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้การทดสอบของ Dunnett การทดสอบทางสถิติดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ Statistica 8.0 (StatSoft) โดยมีระดับนัยสำคัญ 95% (p < 0.05)