อัตราการตายและความเป็นพิษของสารไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ต่อลูกอ๊อดขนาดเล็กในน้ำ

การศึกษาครั้งนี้ประเมินความเป็นอันตราย ความเป็นอันตรายระดับเล็กน้อย และความเป็นพิษของสารเชิงพาณิชย์ไซเปอร์เมทรินสูตรสำหรับลูกอ๊อดในสัตว์ ในการทดสอบแบบเฉียบพลัน ความเข้มข้น 100–800 ไมโครกรัม/ลิตร เป็นเวลา 96 ชั่วโมง ในการทดสอบแบบเรื้อรัง ความเข้มข้นของไซเพอร์เมทรินที่เกิดขึ้นตามธรรมชาติ (1, 3, 6 และ 20 ไมโครกรัม/ลิตร) ถูกทดสอบเพื่อหาอัตราการตาย ตามด้วยการทดสอบไมโครนิวเคลียสและความผิดปกติของนิวเคลียสเม็ดเลือดแดงเป็นเวลา 7 วัน ค่า LC50 ของสูตรไซเพอร์เมทรินเชิงพาณิชย์สำหรับลูกอ๊อดอยู่ที่ 273.41 ไมโครกรัม/ลิตร ในการทดสอบแบบเรื้อรัง ความเข้มข้นสูงสุด (20 ไมโครกรัม/ลิตร) ส่งผลให้อัตราการตายมากกว่า 50% เนื่องจากฆ่าลูกอ๊อดที่ทดสอบไปครึ่งหนึ่ง การทดสอบไมโครนิวเคลียสให้ผลลัพธ์ที่สำคัญที่ความเข้มข้น 6 และ 20 ไมโครกรัม/ลิตร และพบความผิดปกติทางนิวเคลียสหลายจุด ซึ่งบ่งชี้ว่าสูตรไซเพอร์เมทรินเชิงพาณิชย์มีศักยภาพในการก่อกลายพันธุ์ต่อเชื้อ P. gracilis ไซเพอร์เมทรินมีความเสี่ยงสูงต่อสายพันธุ์นี้ ซึ่งบ่งชี้ว่าไซเพอร์เมทรินอาจก่อให้เกิดปัญหาหลายประการและส่งผลกระทบต่อพลวัตของระบบนิเวศทั้งในระยะสั้นและระยะยาว ดังนั้นจึงสรุปได้ว่าไซเพอร์เมทรินในเชิงพาณิชย์มีพิษต่อ P. gracilis
เนื่องจากการขยายตัวอย่างต่อเนื่องของกิจกรรมทางการเกษตรและการประยุกต์ใช้อย่างเข้มข้นการควบคุมศัตรูพืชมาตรการเหล่านี้ทำให้สัตว์น้ำมักสัมผัสกับยาฆ่าแมลง1,2 มลพิษของแหล่งน้ำใกล้พื้นที่เกษตรกรรมอาจส่งผลกระทบต่อการเจริญเติบโตและการอยู่รอดของสิ่งมีชีวิตที่ไม่ใช่เป้าหมาย เช่น สัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก
สัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกกำลังมีความสำคัญเพิ่มขึ้นเรื่อยๆ ในการประเมินเมทริกซ์สิ่งแวดล้อม อะนูรันถือเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่ดีของมลพิษทางสิ่งแวดล้อม เนื่องจากลักษณะเฉพาะของพวกมัน เช่น วงจรชีวิตที่ซับซ้อน อัตราการเจริญเติบโตของตัวอ่อนที่รวดเร็ว สถานะโภชนาการ ผิวหนังที่ซึมผ่านได้10,11 การพึ่งพาน้ำเพื่อการสืบพันธุ์12 และไข่ที่ไม่มีการป้องกัน11,13,14 กบน้ำเล็ก (Physalaemus gracilis) หรือที่รู้จักกันทั่วไปในชื่อกบร้องไห้ ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าเป็นชนิดพันธุ์ที่เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพของมลพิษจากยาฆ่าแมลง4,5,6,7,15 กบชนิดนี้พบในแหล่งน้ำนิ่ง พื้นที่คุ้มครอง หรือพื้นที่ที่มีถิ่นที่อยู่อาศัยหลากหลายในอาร์เจนตินา อุรุกวัย ปารากวัย และบราซิล1617 และได้รับการจัดให้อยู่ในกลุ่มที่เสถียรตามการจำแนกของ IUCN เนื่องจากมีการกระจายตัวที่กว้างขวางและทนต่อสภาพแวดล้อมที่แตกต่างกัน18
มีรายงานผลกระทบไม่ถึงชีวิตในสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกหลังจากได้รับไซเพอร์เมทริน ได้แก่ การเปลี่ยนแปลงพฤติกรรม สัณฐานวิทยา และชีวเคมีในลูกอ๊อด23,24,25 อัตราการตายและเวลาการเปลี่ยนแปลงรูปร่างที่เปลี่ยนแปลงไป การเปลี่ยนแปลงทางเอนไซม์ ความสำเร็จในการฟักไข่ที่ลดลง24,25 ภาวะไฮเปอร์แอคทีฟ26 การยับยั้งการทำงานของเอนไซม์โคลีนเอสเทอเรส27 และการเปลี่ยนแปลงสมรรถภาพการว่ายน้ำ7,28 อย่างไรก็ตาม การศึกษาผลกระทบต่อพันธุกรรมของไซเพอร์เมทรินในสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกยังมีจำกัด ดังนั้น การประเมินความไวของสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกต่อไซเพอร์เมทรินจึงเป็นสิ่งสำคัญ
มลพิษทางสิ่งแวดล้อมส่งผลกระทบต่อการเจริญเติบโตและพัฒนาการตามปกติของสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก แต่ผลกระทบร้ายแรงที่สุดคือความเสียหายทางพันธุกรรมต่อดีเอ็นเอที่เกิดจากการสัมผัสกับสารกำจัดศัตรูพืช13 การวิเคราะห์สัณฐานวิทยาของเซลล์เม็ดเลือดเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่สำคัญของมลพิษและความเป็นพิษที่อาจเกิดขึ้นของสารต่อสัตว์ป่า29 การทดสอบไมโครนิวเคลียสเป็นหนึ่งในวิธีการที่ใช้กันมากที่สุดในการตรวจหาความเป็นพิษทางพันธุกรรมของสารเคมีในสิ่งแวดล้อม30 เป็นวิธีที่รวดเร็ว มีประสิทธิภาพ และราคาไม่แพง ซึ่งเป็นตัวบ่งชี้ที่ดีเกี่ยวกับมลพิษทางเคมีของสิ่งมีชีวิต เช่น สัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก31,32 และสามารถให้ข้อมูลเกี่ยวกับการสัมผัสสารมลพิษทางพันธุกรรม33
วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้คือการประเมินศักยภาพความเป็นพิษของสูตรไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ต่อลูกอ๊อดขนาดเล็กในน้ำโดยใช้การทดสอบไมโครนิวเคลียสและการประเมินความเสี่ยงทางนิเวศวิทยา
อัตราการเสียชีวิตสะสม (%) ของลูกอ๊อด P. gracilis ที่ได้รับไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ในความเข้มข้นต่างกันในช่วงเฉียบพลันของการทดสอบ
อัตราการเสียชีวิตสะสม (%) ของลูกอ๊อด P. gracilis ที่ได้รับไซเปอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ในความเข้มข้นต่างกันระหว่างการทดสอบเรื้อรัง
อัตราการเสียชีวิตที่สูงที่สังเกตพบเป็นผลมาจากผลกระทบต่อพันธุกรรมในสัตว์ครึ่งบกครึ่งน้ำที่สัมผัสกับไซเพอร์เมทรินความเข้มข้นต่างกัน (6 และ 20 ไมโครกรัมต่อลิตร) ดังจะเห็นได้จากการปรากฏตัวของไมโครนิวเคลียส (MN) และความผิดปกติของนิวเคลียสในเม็ดเลือดแดง การเกิด MN บ่งชี้ถึงความผิดพลาดในการแบ่งเซลล์แบบไมโทซิส และสัมพันธ์กับการจับกันของโครโมโซมกับไมโครทูบูลที่ไม่ดี ข้อบกพร่องในคอมเพล็กซ์โปรตีนที่ทำหน้าที่ในการดูดซับและขนส่งโครโมโซม ความผิดพลาดในการแยกโครโมโซม และความผิดพลาดในการซ่อมแซมความเสียหายของดีเอ็นเอ38,39 และอาจเกี่ยวข้องกับภาวะเครียดออกซิเดชันที่เกิดจากยาฆ่าแมลง40,41 พบความผิดปกติอื่นๆ ในทุกความเข้มข้นที่ประเมิน การเพิ่มขึ้นของความเข้มข้นของไซเพอร์เมทรินทำให้ความผิดปกติของนิวเคลียสในเม็ดเลือดแดงเพิ่มขึ้น 5% และ 20% ตามลำดับที่ระดับความเข้มข้นต่ำสุด (1 ไมโครกรัมต่อลิตร) และสูงสุด (20 ไมโครกรัมต่อลิตร) ตัวอย่างเช่น การเปลี่ยนแปลงในดีเอ็นเอของสิ่งมีชีวิตชนิดใดชนิดหนึ่งอาจส่งผลกระทบร้ายแรงต่อการอยู่รอดทั้งในระยะสั้นและระยะยาว ส่งผลให้ประชากรลดลง สมรรถภาพการสืบพันธุ์เปลี่ยนแปลง การผสมพันธุ์ในสายพันธุ์เดียวกัน การสูญเสียความหลากหลายทางพันธุกรรม และอัตราการอพยพที่เปลี่ยนแปลง ปัจจัยทั้งหมดนี้สามารถส่งผลกระทบต่อการอยู่รอดและการดำรงอยู่ของสิ่งมีชีวิตชนิดนั้น42,43 การเกิดความผิดปกติของเม็ดเลือดแดงอาจบ่งชี้ถึงการปิดกั้นกระบวนการไซโตไคเนซิส ส่งผลให้เกิดการแบ่งเซลล์ที่ผิดปกติ (เม็ดเลือดแดงที่มีนิวเคลียสสองนิวเคลียส)44,45 นิวเคลียสที่มีหลายกลีบ (multilobed nucleus) คือส่วนที่ยื่นออกมาจากเยื่อหุ้มนิวเคลียสที่มีหลายกลีบ46 ในขณะที่ความผิดปกติอื่นๆ ของเม็ดเลือดแดงอาจเกี่ยวข้องกับการขยายดีเอ็นเอ เช่น ไต/ก้อนนิวเคลียส47 การมีเม็ดเลือดแดงที่ไม่มีนิวเคลียสอาจบ่งชี้ถึงการขนส่งออกซิเจนที่บกพร่อง โดยเฉพาะอย่างยิ่งในน้ำที่ปนเปื้อน48,49 ภาวะอะพอพโทซิสบ่งชี้ถึงการตายของเซลล์50
การศึกษาอื่นๆ ได้แสดงให้เห็นถึงผลกระทบต่อพันธุกรรมของไซเพอร์เมทริน Kabaña และคณะ51 ได้แสดงให้เห็นถึงการมีอยู่ของไมโครนิวเคลียสและการเปลี่ยนแปลงทางนิวเคลียส เช่น เซลล์ที่มีนิวเคลียสสองนิวเคลียสและเซลล์อะพอพโทซิสในเซลล์ Odontophrynus americanus หลังจากสัมผัสกับไซเพอร์เมทรินความเข้มข้นสูง (5,000 และ 10,000 ไมโครกรัมต่อลิตร) เป็นเวลา 96 ชั่วโมง นอกจากนี้ยังพบการเกิดอะพอพโทซิสที่เกิดจากไซเพอร์เมทรินใน P. biligonigerus52 และ Rhinella arenarum53 ผลการศึกษาเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าไซเพอร์เมทรินมีผลต่อพันธุกรรมของสิ่งมีชีวิตในน้ำหลายชนิด และการทดสอบ MN และ ENA อาจเป็นตัวบ่งชี้ผลกระทบที่ไม่ร้ายแรงต่อสัตว์ครึ่งบกครึ่งน้ำ และอาจนำไปประยุกต์ใช้กับสัตว์พื้นเมืองและสัตว์ป่าที่สัมผัสกับสารพิษ12
สูตรผสมไซเพอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ก่อให้เกิดอันตรายต่อสิ่งแวดล้อมสูง (ทั้งแบบเฉียบพลันและเรื้อรัง) โดยมีค่า HQs สูงกว่าระดับที่สำนักงานปกป้องสิ่งแวดล้อมแห่งสหรัฐอเมริกา (EPA) กำหนด54 ซึ่งอาจส่งผลเสียต่อสปีชีส์นี้หากพบในสิ่งแวดล้อม ในการประเมินความเสี่ยงเรื้อรัง ค่า NOEC สำหรับการตายอยู่ที่ 3 ไมโครกรัมต่อลิตร ซึ่งยืนยันว่าความเข้มข้นที่พบในน้ำอาจเป็นอันตรายต่อสปีชีส์นี้55 ค่า NOEC ที่ทำให้ตัวอ่อนของ R. arenarum ที่สัมผัสกับส่วนผสมของเอนโดซัลแฟนและไซเพอร์เมทรินที่ระดับ 500 ไมโครกรัมต่อลิตรหลังจาก 168 ชั่วโมง และค่านี้ลดลงเหลือ 0.0005 ไมโครกรัมต่อลิตรหลังจาก 336 ชั่วโมง ผู้เขียนแสดงให้เห็นว่ายิ่งสัมผัสนานเท่าใด ความเข้มข้นที่เป็นอันตรายต่อสปีชีส์นี้ก็จะยิ่งลดลงเท่านั้น สิ่งสำคัญคือต้องเน้นย้ำว่าค่า NOEC สูงกว่าของ P. gracilis ที่เวลาสัมผัสเดียวกัน ซึ่งบ่งชี้ว่าการตอบสนองของสปีชีส์ต่อไซเพอร์เมทรินนั้นจำเพาะต่อสปีชีส์ นอกจากนี้ ในแง่ของอัตราการตาย ค่า CHQ ของ P. gracilis หลังจากได้รับไซเพอร์เมทรินสูงถึง 64.67 ซึ่งสูงกว่าค่าอ้างอิงที่กำหนดโดยสำนักงานปกป้องสิ่งแวดล้อมแห่งสหรัฐอเมริกา54 และค่า CHQ ของตัวอ่อนของ R. arenarum ก็สูงกว่าค่านี้เช่นกัน (CHQ > 388.00 หลังจาก 336 ชั่วโมง) บ่งชี้ว่ายาฆ่าแมลงที่ศึกษามีความเสี่ยงสูงต่อสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกหลายชนิด เมื่อพิจารณาว่า P. gracilis ใช้เวลาประมาณ 30 วันในการเปลี่ยนสภาพจนสมบูรณ์56 จึงสรุปได้ว่าความเข้มข้นของไซเพอร์เมทรินที่ศึกษาอาจส่งผลต่อการลดจำนวนประชากร โดยป้องกันไม่ให้ตัวที่ติดเชื้อเข้าสู่วัยผู้ใหญ่หรือระยะสืบพันธุ์ตั้งแต่อายุยังน้อย
จากการประเมินความเสี่ยงของไมโครนิวเคลียสและความผิดปกติอื่นๆ ของนิวเคลียสเม็ดเลือดแดง ค่า CHQ อยู่ในช่วง 14.92 ถึง 97.00 ซึ่งบ่งชี้ว่าไซเพอร์เมทรินมีความเสี่ยงต่อการเกิดพิษทางพันธุกรรมต่อ P. gracilis แม้ในถิ่นที่อยู่ตามธรรมชาติ เมื่อพิจารณาถึงอัตราการตาย ความเข้มข้นสูงสุดของสารประกอบซีนไบโอติกที่ P. gracilis ยอมรับได้คือ 4.24 ไมโครกรัมต่อลิตร อย่างไรก็ตาม ความเข้มข้นที่ต่ำถึง 1 ไมโครกรัมต่อลิตรก็แสดงให้เห็นถึงผลกระทบต่อการเกิดพิษทางพันธุกรรมเช่นกัน ข้อเท็จจริงนี้อาจนำไปสู่การเพิ่มจำนวนของสิ่งมีชีวิตที่ผิดปกติ57 และส่งผลกระทบต่อการพัฒนาและการสืบพันธุ์ของสิ่งมีชีวิตในถิ่นที่อยู่ของพวกมัน ส่งผลให้ประชากรสัตว์ครึ่งบกครึ่งน้ำลดลง
สูตรผสมยาฆ่าแมลงไซเพอร์เมทรินเชิงพาณิชย์แสดงให้เห็นถึงความเป็นพิษเฉียบพลันและเรื้อรังสูงต่อ P. gracilis พบอัตราการตายที่สูงขึ้น ซึ่งอาจเป็นผลมาจากพิษ ดังจะเห็นได้จากความผิดปกติของนิวเคลียสของไมโครนิวเคลียสและเม็ดเลือดแดง โดยเฉพาะอย่างยิ่งนิวเคลียสหยัก นิวเคลียสแฉก และนิวเคลียสเวสิคูลาร์ นอกจากนี้ สายพันธุ์ที่ศึกษายังมีความเสี่ยงต่อสิ่งแวดล้อมเพิ่มขึ้น ทั้งแบบเฉียบพลันและเรื้อรัง ข้อมูลเหล่านี้ เมื่อรวมกับการศึกษาก่อนหน้านี้โดยกลุ่มวิจัยของเรา แสดงให้เห็นว่าแม้แต่สูตรผสมยาฆ่าแมลงไซเพอร์เมทรินเชิงพาณิชย์ที่แตกต่างกัน ก็ยังทำให้กิจกรรมของอะเซทิลโคลีนเอสเทอเรส (AChE) และบิวทิริลโคลีนเอสเทอเรส (BChE) ลดลง รวมถึงภาวะเครียดออกซิเดชัน58 และส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงของกิจกรรมการว่ายน้ำและความผิดปกติในช่องปาก59 ใน P. gracilis ซึ่งบ่งชี้ว่าสูตรผสมยาฆ่าแมลงไซเพอร์เมทรินเชิงพาณิชย์มีความเป็นพิษสูงทั้งในระดับที่ร้ายแรงและระดับที่ร้ายแรงต่อสายพันธุ์นี้ Hartmann และคณะ งานวิจัยชิ้นที่ 60 พบว่าไซเพอร์เมทรินในเชิงพาณิชย์มีพิษมากที่สุดต่อ P. gracilis และ P. cuvieri ซึ่งเป็นพืชสกุลเดียวกันอีกชนิดหนึ่ง เมื่อเปรียบเทียบกับยาฆ่าแมลงอีกเก้าชนิด แสดงให้เห็นว่าความเข้มข้นของไซเพอร์เมทรินที่ได้รับการรับรองตามกฎหมายสำหรับการปกป้องสิ่งแวดล้อมอาจส่งผลให้อัตราการตายสูงและจำนวนประชากรลดลงในระยะยาว
จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อประเมินความเป็นพิษของยาฆ่าแมลงต่อสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก เนื่องจากความเข้มข้นที่พบในสิ่งแวดล้อมอาจทำให้มีอัตราการตายสูงและอาจเป็นอันตรายต่อ P. gracilis ควรส่งเสริมการวิจัยเกี่ยวกับสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบก เนื่องจากข้อมูลเกี่ยวกับสิ่งมีชีวิตเหล่านี้มีน้อย โดยเฉพาะอย่างยิ่งในสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกจากบราซิล
การทดสอบความเป็นพิษเรื้อรังใช้เวลา 168 ชั่วโมง (7 วัน) ภายใต้สภาวะคงที่ และความเข้มข้นต่ำกว่าระดับอันตรายคือ 1, 3, 6 และ 20 ไมโครกรัม ai L−1 ในการทดลองทั้งสองกลุ่ม ได้ประเมินลูกอ๊อดจำนวน 10 ตัวต่อกลุ่มทดลอง โดยทำซ้ำ 6 ครั้ง รวมเป็นลูกอ๊อดทั้งหมด 60 ตัวต่อความเข้มข้น ขณะเดียวกัน การทดลองที่ใช้น้ำเพียงอย่างเดียวเป็นตัวควบคุมเชิงลบ ชุดการทดลองแต่ละชุดประกอบด้วยจานแก้วปลอดเชื้อขนาดความจุ 500 มิลลิลิตร และความหนาแน่น 1 ลูกอ๊อดต่อสารละลาย 50 มิลลิลิตร ขวดแก้วถูกปิดด้วยฟิล์มโพลีเอทิลีนเพื่อป้องกันการระเหย และมีการเติมอากาศอย่างต่อเนื่อง
น้ำถูกวิเคราะห์ทางเคมีเพื่อหาความเข้มข้นของสารกำจัดศัตรูพืชที่เวลา 0, 96 และ 168 ชั่วโมง ตามข้อมูลของ Sabin และคณะ 68 และ Martins และคณะ 69 การวิเคราะห์ดำเนินการที่ห้องปฏิบัติการวิเคราะห์สารกำจัดศัตรูพืช (LARP) ของมหาวิทยาลัย Federal University of Santa Maria โดยใช้แก๊สโครมาโทกราฟีควบคู่กับแมสสเปกโตรมิเตอร์แบบสามควอดรูโพล (Varian model 1200, Palo Alto, California, USA) การวิเคราะห์เชิงปริมาณของสารกำจัดศัตรูพืชในน้ำแสดงไว้เป็นข้อมูลเสริม (ตาราง SM1)
สำหรับการทดสอบไมโครนิวเคลียส (MNT) และการทดสอบความผิดปกติของนิวเคลียสเม็ดเลือดแดง (RNA) ได้วิเคราะห์ลูกอ๊อด 15 ตัวจากแต่ละกลุ่มทดลอง ลูกอ๊อดถูกวางยาสลบด้วยลิโดเคน 5% (50 มก./กรัม-170) และเก็บตัวอย่างเลือดโดยการเจาะหัวใจโดยใช้กระบอกฉีดยาเฮปารินแบบใช้แล้วทิ้ง เตรียมแผ่นเลือดบนสไลด์กล้องจุลทรรศน์ที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว ตากแห้ง ตรึงด้วยเมทานอล 100% (4 องศาเซลเซียส) เป็นเวลา 2 นาที แล้วย้อมด้วยสารละลาย Giemsa 10% เป็นเวลา 15 นาทีในที่มืด เมื่อสิ้นสุดกระบวนการ สไลด์จะถูกล้างด้วยน้ำกลั่นเพื่อขจัดคราบส่วนเกิน และนำไปตากแห้งที่อุณหภูมิห้อง
เซลล์เม็ดเลือดแดงอย่างน้อย 1,000 เซลล์จากลูกอ๊อดแต่ละตัวถูกวิเคราะห์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์กำลังขยาย 100 เท่า พร้อมเลนส์วัตถุ 71 เพื่อตรวจหา MN และ ENA เซลล์เม็ดเลือดแดงทั้งหมด 75,796 เซลล์จากลูกอ๊อดถูกประเมินโดยพิจารณาความเข้มข้นของไซเพอร์เมทรินและกลุ่มควบคุม วิเคราะห์ความเป็นพิษต่อพันธุกรรมตามวิธีของ Carrasco และคณะ และ Fenech และคณะ 38,72 โดยการหาความถี่ของรอยโรคนิวเคลียสต่อไปนี้: (1) เซลล์ที่ไม่มีนิวเคลียส: เซลล์ที่ไม่มีนิวเคลียส; (2) เซลล์อะพอพโทซิส: เซลล์แตกตัวเป็นนิวเคลียส เซลล์ตายตามโปรแกรม; (3) เซลล์ที่มีนิวเคลียสสองนิวเคลียส: เซลล์ที่มีนิวเคลียสสองนิวเคลียส; (4) เซลล์นิวเคลียสบัดหรือเซลล์ตุ่ม: เซลล์ที่มีนิวเคลียสที่มีส่วนยื่นออกมาเล็กๆ ของเยื่อหุ้มนิวเคลียส ตุ่มมีขนาดใกล้เคียงกับไมโครนิวเคลียส; (5) เซลล์ที่ถูกแคริโอไลซิส: เซลล์ที่มีเพียงโครงร่างของนิวเคลียสที่ไม่มีวัสดุภายใน; (6) เซลล์ที่มีรอยบาก: เซลล์ที่มีนิวเคลียสที่มีรอยแตกหรือรอยบากที่เห็นได้ชัดในรูปร่าง เรียกอีกอย่างว่านิวเคลียสรูปไต; (7) เซลล์ที่มีกลีบ: เซลล์ที่มีนิวเคลียสยื่นออกมาใหญ่กว่าเวสิเคิลที่กล่าวถึงข้างต้น; และ (8) เซลล์ขนาดเล็ก: เซลล์ที่มีนิวเคลียสที่ควบแน่นและไซโทพลาสซึมที่ลดลง การเปลี่ยนแปลงดังกล่าวนำมาเปรียบเทียบกับผลการควบคุมเชิงลบ
ผลการทดสอบความเป็นพิษเฉียบพลัน (LC50) ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ GBasic และวิธี TSK-Trimmed Spearman-Karber74 ข้อมูลการทดสอบเรื้อรังได้รับการทดสอบล่วงหน้าสำหรับค่าความคลาดเคลื่อนปกติ (Shapiro-Wilks) และความแปรปรวนแบบสม่ำเสมอ (Bartlett) ผลการวิเคราะห์ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ใช้การทดสอบ Tukey เพื่อเปรียบเทียบข้อมูลระหว่างกัน และใช้การทดสอบ Dunnett เพื่อเปรียบเทียบข้อมูลระหว่างกลุ่มทดลองและกลุ่มควบคุมที่ให้ผลลบ
ข้อมูล LOEC และ NOEC วิเคราะห์โดยใช้การทดสอบ Dunnett ทดสอบทางสถิติโดยใช้ซอฟต์แวร์ Statistica 8.0 (StatSoft) โดยมีระดับนัยสำคัญทางสถิติ 95% (p < 0.05)